【摘 要】
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水稻谷蛋白(Glutelin)包括酸性亚基(α)与碱性亚基(β),利用SDS-PAGE方法可以分别将其分为α-1,α-2,α-3和β-1,β-2,β-3组分.采用甲基亚硝基脲(MNU)诱变日本栽培稻品种Kin
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水稻谷蛋白(Glutelin)包括酸性亚基(α)与碱性亚基(β),利用SDS-PAGE方法可以分别将其分为α-1,α-2,α-3和β-1,β-2,β-3组分.采用甲基亚硝基脲(MNU)诱变日本栽培稻品种Kinmaze(Oryza sativa L.ssp Kinmaze)受精卵获得水稻α-1亚基含量增高突变体EM-413,对EM-413和野生型亲本杂交F<,1>代和F<,2>代的SDS-PAGE、等电聚焦和Northern杂交分析表明,α-1亚基含量增高是谷蛋白GluA-2基因过量表达的结果;利用PCR方法从Kinmaze基因组中分离到5Kb的5上游序列,序列比对表明突变体EM-413GluA-2基因翻译启始位点上游1938bp处的发生了单碱基突变(A-G),在上游序列中产生了一个与G-Box极为相似的结构.为了研究GluA-2基因过量表达的机理,将UidA基因置于一系列GluA-2基因5上游序列缺失体下游,分别导入水稻和烟草中,对获得的转基因植株种子的GUS活性分析表明,似G-Box可能是一个与GluA-2基因表达量相关的调控元件;进一步分析了所获得的GluA-2基因上游序列的时空表达模式,结果表明在报告基因仅在水稻胚乳中表达,在开花后13-15天表达量达到最高,随后逐渐降低.利用基因枪将谷蛋白GluA-2基因的cDNA序列导入普通小麦Bobwhite(Triticum aestivum cv. bobwhite).经PCR和Southern杂交鉴定共获得了四棵转基因植株;Northern和SDS-PAGE分析表明,GluA-2基因在三棵转基因植株中表达并可以稳定遗传,在一棵转基因植株中未检测到GluA-2基因的表达,但其高分子量麦谷蛋白亚基Bx7和By9的含量显著降低并且可遗传至T<,1>代.
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