背景:前列腺癌(PCa)作为男性最常见的恶性肿瘤之一严重危害男性健康,而临床上使用的生物标志物在敏感性和特异性方面存在局限性,例如前列腺特异性抗原(PSA)。因此,我们需要发现更好的的PCa生物标志物。最近对人体体液中分离出来的外泌体研究表明,其所含的蛋白有可能为PCa提供更好的、无创液体生物标志物。实验方法:使用试剂盒从40例临床血液样品中提取外泌体,样品根据病理参数及临床诊断分为正常组、低危组、高危组和转移组。外泌体中的蛋白质经过胰酶酶切后,用nano液相色谱和Q-Exactive Orbitrap质谱串联(LC-MS/MS)技术进行数据采集,再通过NSAF算法对检测出的蛋白进行非标定量。这些蛋白质经生物信息学的深入挖掘,找出候选生物标记物,并用Western印迹和PRM-MS技术进行验证。结果:当每组蛋白的检出率为50%时,这些样品经聚类分析后能非常好地归为4组,与初始分组几乎一样。经生物信息学深度筛选后,找出10个候选内参蛋白、20个候选检出差异蛋白和14个候选表达差异蛋白。通过Western印迹和LC-PRM-MS技术验证后,确定CD5L、Clusterin、GPX3这三个表达量高又稳定的蛋白适合作为泌尿系统的内参蛋白。同时,还对差异性蛋白进行初步验证。结论:使用超高分辨率液质串联质谱可以对血液来源的外泌体蛋白进行很好检测,筛选出的CD5L、Clusterin、GPX3三个蛋白可以作为泌尿系统中血浆外泌体的内参蛋白。为了筛选具有特异性和灵敏度的差异性蛋白,我们需要进一步的验证。背景:黑色素瘤是一种恶性程度极高的侵袭性恶性肿瘤,80%的皮肤癌死亡患者为黑素瘤。尽管最近在新的治疗方法方面取得了重大进展,但大多数转移性黑色素瘤患者仍然缺乏有效治疗手段,导致预后很差,迫切需要研发更有效的黑色素瘤治疗药物。最近,我们发现了一个以前不为人知的现象,黑色素瘤组织中的EYA1基因表达量明显高于正常对照组。EYA蛋白在细胞增殖、分化、凋亡、细胞周期、先天免疫和DNA损伤修复等方面具有重要的生理学功能,同时该基因还参与多种肿瘤的发生发展。然而,EYA1与黑色素瘤的关系尚不清楚。实验方法:利用组织芯片技术研究EYA1在正常皮肤、原发性黑素瘤和转移黑色素瘤中的表达水平。利用EYA1敲低和高表达A375细胞研究黑素瘤细胞增殖及迁移侵袭能力。通过EYA1高表达A375和B16细胞小鼠成瘤实验,我们检测EYA1与黑素瘤发生发展的功能。利用流式细胞术检测EYA1在细胞周期中的作用。采用免疫荧光技术对EYA1蛋白在细胞中的定位进行观察。另外,Bio-ID技术帮助我们发现与EYA1具有物理相互作用的蛋白。实验结果:组织芯片的结果表明EYA1伴随着黑色素瘤的发生发展,表达量增加。EYA1蛋白主要定位在细胞核中,而细胞质中的较少。体外MTS实验和体内的小鼠成瘤实验验证了EYA1的高表达能促进促进黑色素瘤细胞增殖。同时,EYA1还增强了黑色素瘤细胞的迁移能力。EYA1通过促进细胞周期从G2/M期到G1期和G1期到S期的转变,从而加快细胞周期进程,促进细胞增殖。结论:EYA1是黑色素瘤发病过程中的致病因子,能加速细胞周期的转变,促进黑色素瘤的增殖和成瘤,或许可作为新型的抗癌靶点。