聚合物修饰电极的制备及其在测定生物分子方面的研究与应用

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多巴胺(DA)是一种重要的儿茶酚胺类神经递质,对哺乳动物神经系统中信号的传递有着重要的影响。它在机体内的浓度影响多种生理过程,其含量的改变可导致一些重要疾病如精神分裂症、帕金森氏症;尿酸(UA)是人体内嘌呤核苷酸分解代谢过程中的最终产物,体液中尿酸的含量变化可以充分反映出人体新陈代谢、免疫等机能的状况,同时也可间接反映出与嘌岭代谢的有关疾病如痛风、白血病和肺炎等;酪氨酸(Tyr)是蛋白质的重要组分之一,对于维护人体营养均衡具有必不可少的作用,人体如果摄入酪氨酸失衡会引起某些疾病如白化病、黑尿症、抑郁症以及其他的一些心理疾病:色氨酸(Trp)是一种重要的氨基酸,被广泛应用于医药、食品和饲料添加领域。另外,Trp也是人体重要的神经递质5-羟色胺的前体,具有治疗抑郁、失眠和和减少关节痛、神经痛、肌肉痛等有着重要的作用,而色氨酸过量则会对人体及动物引起一些负面影响,如腹泻、发烧和恶心等。由此看来,对生物体中DA、UA、Tyr和Trp的准确测量意义重大。本课题就是着手准确、灵敏地测定生物样品中DA、UA、 Tyr和Trp的含量。国内外有很多人都在研究DA、UA、Tyr以及Trp的测定,检测这些物质常用的分析方法有分光光度法、色谱法、化学发光法和毛细管电泳法等。这些方法都有各自的优点,比如分析速度快,分析方法简单等,但是都有一个共同的缺点:仪器设备昂贵。而电化学也是一种非常重要的分析方法,所使用的仪器设备相对便宜、容易操作、灵敏度高,尤其是聚合物修饰电极,因为具有较多优点而备受关注,如:较好的稳定性、较高的催化活性、较强的选择性、以及在电极表面的厚度可控制等。本文的三部分工作中分别选用了三种聚合物修饰电极,并分别研究了他们对DA、UA、Tyr以及Trp的测定效果。此方法操作简单、成本低,而且在对分析物的测定中取得了较低的检出限、较高的灵敏度和较好的选择性。本文的工作主要分为以下三部分:1.本文制备了由聚邻氨基苯磺酸修饰的玻碳电极(PABSA/GCE),并采用差分脉冲伏安法(DPV)将其应用于对多巴胺、尿酸和酪氨酸的同时测定。电化学阻抗(EIS)和循环伏安法(CV)技术均被用于研究纳米网状聚苯胺-聚邻氨基酚复合膜修饰的玻碳电极(PABSA/GCE)。与GCE相比,PABSA复合膜修饰的GCE表现出了较好的电化学活性,对UA和Tyr的同时测定和选择性测定表现出了良好的选择性和灵敏度。由于UA和Tyr表现出了不同的电化学响应,无论采用循环伏安法(CV)还是DPV, PABSA/GCE均能将DA和UA重叠的氧化峰区分为两个完全分开的伏安峰并且提高了峰电流响应值。DPV峰电流值随着UA和Tyr的浓度分别在0.05~230μmol/L和0.08~300μmol/L范围内线性增长,相关系数分别为0.9990和0.9991。UA和Tyr的检测限(36)分别为0.05和0.08μmol/L。PABSA/GCE表现出了良好的重现性和稳定性,已经用于同时样品中时对UA和Tyr的测定并且获得了满意的结果。2.采用循环伏安法(CV)将磺基水杨酸(PSA)聚合修饰在玻碳电极(GCE)表面制备了聚磺基水杨酸修饰的玻碳电极(PSA/GCE)。并成功用于DA、UA和Tyr的同时测定。结果表明:聚磺基水杨酸修饰玻碳电极不仅能很好地改善DA、UA和Tyr的电化学行为,而且能将其重叠的氧化峰分开成三个明显而尖锐的氧化峰,DA和UA的峰电位差为160mV,UA和Tyr的峰电位差为320mV,故该修饰电极可用于对混合液中DA、UA和Tyr的同时测定。在优化的实验条件下,DA、UA和Tyr氧化峰电流与其浓度分别在0.1-115、1-235和0.1-390pmmolL-1范围内呈良好的线性关系,相关系数分别为0.9980,0.9969和0.9989,检出限(S/N=3)分别为0.05μmol L-1、0.3μmol L-1和0.08μmnol L-1。在pH=4.0的磷酸缓冲溶液(PBS)中,PSA/GCE展现出了很好的电催化活性,电极表面的电化学反应过程是吸附控制过程。该修饰电极重现性高、稳定性强,而且具有较好的选择,较高的灵敏度和较宽的检测范围,将其应用于尿液和血清样本中DA、UA和Tyr的同时测定,获得满意的结果。3.在玻碳电极(GCE)上合成了3,4-乙烯二氧噻吩(EDOT)和邻苯二胺(OPD)复合膜,并使用差分脉冲伏安法将该复合膜用于测定色氨酸和酪氨酸。氨酸。采用电化学阻抗(EIS)和循环伏安法(CV)研究了3.4-乙烯二氧噻吩(EDOT)和邻苯二胺(OPD)复合膜修饰的坡碳电极(PEDOT-OPD/GCE),结果表明PEDOT-OPD膜具有良好的电化学活性。在对Trp和Tyr的测定中,与裸GCE、EDOT修饰电极以及OPD修饰电极相比,PEDOT-OPD复合膜修饰的GCE表现了较好的灵敏度和选择性,使用循环伏安法(CV)可将Trp和Tyr的过电位分别减少70mV和60mV并且提高了电流响应值。在与DA和UA共存时,Trp和Tyr的DPV峰电流响应值分别在0.06-220μmolL-1和0.1-250μmolL-1范围内与浓度呈线性增长关系,Trp和Tyr的检测限(3σ)和相关系数分别为0.006μmol L-1和0.05μmol L-1,0.9950和0.9958。PEDOT-OPD/GCE表观了较好的重现性和稳定性。
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