论文部分内容阅读
研究背景与目的肺癌是最常见的恶性肿瘤,其中非小细胞肺癌(NSCLC)约占原发性肺癌的85%左右。早期非小细胞肺癌的预后较好,但在临床工作中大多数就诊的患者已处于疾病的晚期。目前临床上尚无能够有效检测非小细胞肺癌的生物标志物。外泌体(exosomes)是细胞释放的,直径在40-150nm的细胞外囊泡,其内包裹的核酸和蛋白质能够反应细胞的内在变化,并且在疾病的发生进展中起着重要作用。本研究尝试鉴别在非小细胞肺癌尤其是早期非小细胞肺癌与健康人群差异表达的exosomal微小RNA(microRNA),筛选出可作为诊断早期非小细胞肺癌的生物标志物。方法首先分析课题组前期血清及细胞上清exosomes测序结果,筛选出在肺癌exosomes中显著差异表达的microRNA。进一步使用Exoquick外泌体分离试剂盒提取血清中的exosomes,通过实时荧光定量PCR分析非小细胞肺癌与健康对照组血清exosomes中microRNA的表达差异,通过计算受试者工作特征曲线(ROC曲线)评价候选生物标志物的诊断效能。通过实时荧光定量PCR观察潜在microRNA在肺癌组织以及肺癌细胞中的表达水平。采用细胞增殖试剂盒检测microRNA对肿瘤细胞增殖能力的影响。通过细胞侵袭实验和细胞迁移实验验证目的基因对肿瘤细胞迁移侵袭能力的改变。结果1 microRNA-192-5p、microRNA-320a、microRNA-484、microRNA-2110 和microRNA-744-5p在非小细胞肺癌患者血清exosomes中低表达,差异具有统计学意义。2 Exosomal microRNA-744-5p对早期非小细胞肺癌具有较好的诊断效能,其ROC曲线下面积达到0.943。3 microRNA-744-5p在肺癌组织和细胞中高表达,促进肺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力。结论血浆中低表达的exosomal microRNA-744-5p有望成为诊断早期非小细胞肺癌的生物标志物。肺癌组织和细胞中高表达microRNA-744-5p,促进细胞增殖、迁移及侵袭能力。