论文部分内容阅读
食源性疾病已成为全球性的公共卫生问题,其中由食源性致病菌引起的食源性疾病发病率最高,对人类健康造成了巨大威胁。传统的食源性致病菌检测方法在检测时间、灵敏度和特异性上存在一定的缺陷,不能满足日益严格的检测需要。因此,发展更为快捷,方便、灵敏度高和特异性好的检测方法对保障食品安全具有重要意义。分子马达是一种生物大分子,广泛存在于细胞内,近年来得到国内外的普遍关注,其中旋转分子马达F0F1-ATPase作为生物传感器被多次应用于食源性致病菌的检测。该马达具有灵敏度高、特异性强等特点。因此本研究以分子马达F0F1-ATPase作为信号分子,以适配体作为识别分子,构建基于适配体识别的分子马达生物传感系统,并应用于食源性致病菌的检测,主要工作内容包括:首先,构建了一种基于适配体识别-F0F1-ATPase生物传感检测鼠伤寒沙门氏菌的方法。通过F0F1-ATPase表面ε亚基-ε亚基抗体-生物素-亲和素-生物素化的鼠伤寒沙门氏菌适配体,将适配体固定于载色体表面;同时利用p H敏感型荧光染料F-DHPE监测载色体膜外荧光强度的变化。当体系中存在沙门氏菌时,适配体特异性与沙门氏菌结合,使得F0F1-ATPase酶的负荷增加,引起旋转速度下降,从而导致泵出载色体外的质子流速率下降,继而p H值升高,最终导致荧光强度增强,通过监测荧光强度的变化实现对沙门氏菌的检测。结果显示,沙门氏菌在101-104 cfu/m L范围内与相对荧光强度具有良好的线性关系(y=1085.13x+363.98,R2=0.9944),最低检测限为10 cfu/m L。该方法已成功应用于牛奶实际样品的检测。其次,构建了以量子点为荧光指示物的F0F1-ATPase-适配体生物传感检测副溶血性弧菌的方法。通过F0F1-ATPase表面ε亚基-ε亚基抗体-生物素-亲和素-生物素化的副溶血性弧菌适配体,将适配体固定于载色体表面;同时将p H敏感型量子点标记到载色体膜外,形成基于适配体识别的分子马达生物传感系统。当体系中存在副溶血性弧菌时,适配体特异性与副溶血性弧菌结合,使得F0F1-ATPase酶的负荷增加,引起旋转速度下降,继而引起H+由载色体膜内泵出膜外的速率变慢,膜外的H+浓度变小,p H值升高,量子点荧光强度增强,通过监测荧光强度的变化实现对副溶血性弧菌的检测。结果显示,副溶血性弧菌在50-106 cfu/m L范围内与体系相对荧光强度具有良好的线性关系(y=138.3x+13.05,R2=0.9962),最低检测限为5 cfu/m L。所建立方法已经成功应用于市售虾的检测。