研究目的:TOX2是一种转录因子,属于TOX家族。虽然TOX2已被证明在NK细胞的发育过程中发挥重要的作用,但对TOX2在淋巴细胞发育过程中的作用仍知之甚少。利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建TOX2基因敲除小鼠模型,能对其功能和作用进行深入研究。研究方法:具有设计简单,效率高等优点的CRISPR/Cas9基因编辑技术成为了目前发展最为迅速的基因编辑技术。本研究通过CRISPR/Cas9基因编辑技术成功构建了TOX2基因敲除小鼠。首先,根据CRISPR/Cas9基因编辑技术的相关原理,设计了特异性的sg RNA（single guide RNA）,并将sg RNA连接到PX459质粒载体上。在体外和细胞水平,对sg RNA的有效性进行验证。将证实有效的重组质粒注射到小鼠受精卵中,待其稳定遗传并得到纯合子小鼠后,对纯合子小鼠进行初步分析。研究结果:本研究中,共设计了3个sg RNA。经体外和细胞水平验证,证实sg RNA1和sg RNA2的效果较好。然后通过原核显微注射,得到了TOX2基因敲除小鼠,并能够稳定遗传,TOX2基因敲除小鼠得以成功构建。运用流式细胞术对TOX2基因敲除小鼠的淋巴细胞及其亚群的数据进行分析,结果显示均无明显变化。结论:经分析显示,在小鼠中的TOX2基因对T、B淋巴细胞的发育没有明显影响。而成功构建TOX2基因敲除小鼠模型对进一步研究TOX2基因的功能提供了重要基础。