NPRl基因(NonexpressorofPRgens)是抗病信号传导途径中一个关键的调控基因，该基因能激发植物防御机制的产生，提高植物防卫反应的强度或加快防卫反应的速度，使植物或转基因植物具有广谱的抗病性。本研究利用同源克隆法，根据已报道的拟南芥NPRl基因核苷酸序列，设计引物，利用RT-PCR技术从甘蓝型油菜总RNA中扩增得到一段约1800bp的核苷酸片段，将其片段与pGEM-TEasy载体连接，转化大肠杆菌(Esherichiacoli)DH5Q，通过筛选得到阳性克隆重组质粒，对该重组质粒进行DNA序列测定。序列分析结果表明：该片段长1872bp，含一个完整开放阅读框架，推测编码由624个氨基酸组成的蛋白质，进一步分析显示，编码区从第255个氨基酸到第383个氨基酸区域共129个氨基酸可能形成Ankyrin重复结构。上述结果表明，在与拟南芥同属十字花科的油菜中同样存在NPRl基因。 本研究进一步构建该基因的植物表达载体。pCAMBIA2300是适用于双、单子叶植物转化的高效表达载体。以pCAMBIA2300为基本构架，使NPRl基因置于CaMV35s启动子引导下，使用Nos终止子，构建能在单、双子叶植物中高效表达的植物表达载体，转化大肠杆菌DH5a，经过PCR鉴定后，挑选阳性的重组克隆，进行序列测定，以验证插入片段的大小及方向是否正确。结果表明，插入片段的序列大小及方向与预计的完全吻合，从而证明了植物表达载体构建已经成功，命名为p2300nprl。将经测序确认插入位点和方向正确的质粒(转化了p2300nprl的DH5α)，通过扩大培养，抽提重组质粒p2300nprl，用冻融法将其转化到根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)EHAl05菌株中，在LB平板(含有rif,s仃和kam抗性)上培养，挑取白色单菌落摇菌扩大培养，然后经PCR检测鉴定，结果表明植物表达载体p2300nprl已成功地导入了农杆菌EHAl05菌株中，为利用该基因进行植物的遗传转化奠定了坚实的基础。 本实验为研究甘蓝型油菜NPRl基因的功能及其抗病机理，利用农杆菌介导法，将已构建的高效植物表达载体p2300nprl转入烟草中。用1∞块烟草的叶盘与含有油菜NPRl基因农杆菌EHAl05共培养，然后将其转入培养基中诱导生芽、生根，将生根的烟草移入温室中生长，28℃培养约1月，得到150株成活的烟草再生植株，然后对这些再生植株进行PCR检测。结果得到，有27株再生植株含有NPRl基因的特异条带，说明NPRl基因已经成功地转入烟草植株中。 对含NPRl基因的第二代(R2)转基因进行抗烟草青枯病(Rslstoniasolancearun)、赤星病(Alternariaalternate)病害的测定。结果表明转入甘蓝型油菜NPRl基因的烟草对由真菌所引起的烟草赤星病和细菌所引起的烟草青枯病均有一定的抗性。