沼液养殖小球藻条件优化及藻基蛋鸭饲料添加剂研制

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随着畜禽养殖业的规模化发展,畜禽养殖废水集中排放造成了土壤、水环境等的污染,给环境治理带来了严重负荷。微藻作为一种高光合作用效率的的低等生物,可以利用废水中的NPK、微量元素以及简单的有机小分子进行生长代谢,即可达到沼液脱氮除磷的净化效果又可获得大量的微藻生物质,所以利用微藻治污作为一种有机废水生物治理的新型方法近年来被科学家们广泛研究。本研究从猪场沼液中筛选能适应有机污水环境的嗜污微藻,开发利用微藻与微生物之间的的协同共生作用,探索菌藻共培养的最佳条件,以期提高微藻在养猪废水中的生物活性和生长速率,积累更多的微藻生物质,经适当预处理的猪场沼液培养后的微藻中富含蛋白质、不饱和脂肪酸、各种功能性多糖和细胞色素。本研究还初步探讨了小球藻粉与杜仲叶粉复配后,一起添加到蛋鸭饲料中,试图研究微藻及杜仲对蛋鸭产蛋性能及蛋品质的影响。主要研究结果如下:首先从养猪沼液中筛选出了能够适应有机废水环境而正常生长的微藻,经形态学初步鉴定为小球藻属普通种(Chlorella sp.);同时筛选分离出了能够与小球藻共生的微生物,通过菌液分离实验,进一步确认了菌对小球藻的生长促进作用,并得到了小球藻在最佳菌原液的存在下,叶绿素含量高达7.586mg/L,而空白组的叶绿素含量只有3.325mg/L,最佳菌株经过16S rDNA序列分析为乳酸杆菌属(Lactobacillus sp.)。以藻干重及藻液中藻的吸光度作标准曲线,得出小球藻在680nm波长下的吸光度与藻液中的微藻干重呈现很好的线性关系,可以用藻液的吸光度来间接的表征小球藻的生长状态,同时也可以通过藻液的吸光度来计算藻的生物量。通过单因素实验表明,在本试验条件下,菌藻共培养环境中的最佳pH为8.0,最佳菌藻接种比例为2:30,最佳培养温度为30℃;微藻生物量(干重)分别为1.016g/L、1.028g/L、1.020g/L;正交实验表明菌藻共生培养的最佳条件为:温度25℃、pH=7.0、废糖蜜添加量2mL(即44.88mg)、菌藻比(v/v)为4:30。在这些因素的综合效应下,小球藻培养6天后,叶绿素含量高达4.650mg/L,微藻生物质干重达到0.795g/L。此外,正交实验得出温度对小球藻细胞中叶绿素a的含量具有显著影响,而pH、菌藻比、废糖蜜对叶绿素a的形成没有显著效应,这四因素对小球藻叶绿素a形成的影响程度大小依次为:温度>pH>废糖蜜添加量>菌藻比;在所有实验组中,通过比较培养液中葡萄糖的消耗量和叶绿素a的形成量,发现二者并没有直接的线性关系,原因可能是菌和藻随着培养条件的变化,对糖的相对代谢速率也会发生变化,当温度高于30℃时,培养液中的糖大部分为细菌所消耗。通过傅里叶红外光谱对不同实验组中的小球藻的三大主要物质的相对含量分析,得出各处理组中的小球藻波形相似,只是一些波数下的相对峰高存在差别,经标准化后分析得知在不同的共培养条件下小球藻中碳水化合物的相对含量差异显著,含量最高的实验组为培养温度25℃,pH=8,废糖蜜量67.32mg,菌藻比2:30,这为今后小球藻的定向培养提供了参考,但这些因素的综合效应对小球藻细胞中的蛋白质和油脂含量影响不大。蛋鸭的基础日粮中添加1%的小球藻粉及2%的小球藻粉-杜仲粉的等量混合物之后,蛋鸭的产蛋个数、产蛋量、产蛋率及耗料量没有显著影响,但是,在添加了微藻粉及微藻与杜仲粉的等量混合物后平均蛋重分别增加了3.8%和0.7%;蛋黄颜色提高了近3个罗氏比色单位;微藻组、微藻与杜仲叶粉等量混合组及空白组的哈夫单位值分别为72.86、76.94、70.23,对应的蛋白质含量为12.36%、12.01%、11.71%,说明微藻与杜仲叶粉等量混合物作为现行蛋鸭饲料添加剂可不同程度地改善鸭蛋的色值、哈夫单位值和蛋白质含量;微藻组及微藻杜仲叶粉等量混合组的鸭蛋的胆固醇含量比空白组分别降低了14.87%和21.15%,提高了鸭蛋的食用品质。微藻-杜仲叶粉等量混合组的料蛋比为7.51,比对照组降低了0.7%。
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