【摘 要】
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为探讨M3-M4环靶片段免疫接种策略的可行性,该实验采用原核重组并高效表达的M3-M4环靶片段(163aa,18.8KD)通过三种途径(鼻腔、皮下、腹腔)免疫小鼠,用组织学和免疫组织化学染
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为探讨M3-M4环靶片段免疫接种策略的可行性,该实验采用原核重组并高效表达的M3-M4环靶片段(163aa,18.8KD)通过三种途径(鼻腔、皮下、腹腔)免疫小鼠,用组织学和免疫组织化学染色方法进行小鼠重要脑区形态学观察,以评估该免疫接种的中枢神经系统安全性.实验结果如下:1.双抗体夹心ELISA测定血清细胞因子浓度.第一次加强免疫后1天,鼻腔免疫小鼠血清干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)和IL-6较对照组升高(P<0.05),皮下免疫小鼠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和IFN-γ、IL-4和IL-6较对照组明显升高(P<0.01).2.间接ELISA测定血清特异性抗体IgG.末次免疫后7天,鼻腔免疫小鼠血清抗体阴性,皮下及腹腔免疫小鼠血清抗体阳性,其中皮下组约1:800,腹腔组约1:400.3.流式细胞术测定鼻相关淋巴组织(NALT)、脾T淋巴细胞亚群末次免疫后7天,鼻腔免疫小鼠NALT和脾脏CD4<+>、CD8<+>T细胞占总细胞数百分比升高(P<0.05、P<0.01),CD4<+>/CD8<+>无变化.皮下免疫小鼠脾CD4<+>、CD8<+>T细胞百分比升高(P<0.01),CD4<+>/CD8<+>降低.4.脑组织学和免疫组织化学染色末次免疫后7天取脑,各免疫组小鼠脑HE和Nissl染色显示正常组织形态,各脑区未见病理性改变和细胞脱失,c-Fos和小胶质细胞免疫组织化学染色阴性.该实验证明M3-M4环重组肽经皮下和腹腔途径接种诱导小鼠产生了特异性免疫应答,未见脑内异常形态学变化,具有中枢神经系统安全性.该实验为下一步动物疾病模型评估和继续探索免疫接种方案奠定了基础.
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