【摘 要】
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MicroRNA(miRNA)是在真核生物中发现的一类内源性的具有调控功能的非编码RNA,长约19~25个核苷酸。大量研究表明miRNA的异常表达通常与癌症的发生发展及对治疗药物的临床响应有
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MicroRNA(miRNA)是在真核生物中发现的一类内源性的具有调控功能的非编码RNA,长约19~25个核苷酸。大量研究表明miRNA的异常表达通常与癌症的发生发展及对治疗药物的临床响应有密切联系,这一特征决定它可作为一种新型的肿瘤诊疗标志物。因此,开发简单直接、灵敏度高、特异性好的miRNA检测方法对了解其生物学功能和癌症的早期诊断非常重要。 我们基于恒温指数扩增反应开发了两种高灵敏定量检测miRNA的方法。富含鸟嘌呤(G)的核酸片段与氯化高铁血红素(hemin)相互作用能形成G-四联体配合物,表现出很强的过氧化物酶活性,在H2O2介导下能催化ABTS2-发生氧化反应并伴随有溶液颜色变化。利用这一特性,我们提出了利用恒温指数扩增反应特异性合成具有催化活性的G-四联体脱氧核酶高灵敏度检测miRNA的新方法。该方法可特异性检测浓度为1fM的靶标miRNA。 荧光纳米铜团簇是由几个至几十个铜原子组成核心,亲水及生物相容性的DNA外壳形成的核/壳型分子级聚集体结构,具有量子产率高、荧光发射波长可调、耐光漂泊等特点,成为一种应用于生物分析及临床诊断的新型荧光量子点材料。利用这一特点,我们提出了一种以序列特异性双链DNA为模板合成荧光纳米铜簇作为新型荧光探针定量检测miRNA的方法。该方法可以特异性检测浓度为1pM的靶标miRNA。
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