论文部分内容阅读
Septin基因家族是一类保守的GTP结合蛋白,广泛存在于所有真核动物细胞中,功能广泛:细胞周期调控、小泡运输、胞质分裂、细胞迁移、染色体分裂、细胞膜极性调控、精子和纤毛等结构形成的调控等众多生命过程,但已发表的众多研究往往是基于体外细胞实验,在模式生物体内的研究鲜有报道,基于此,我们利用斑马鱼为研究材料,开展了SEPTIN基因家族在斑马鱼体内的功能研究。在众多septin成员中,septin6的功能还从未有人报道过,而且已报道了功能的septin基因很多位于SEPT2,SEPT3和SEPT7亚组,SEPT6亚组的功能还未有报道。综上原因,我们选择了septin6为研究对象,开展了在斑马鱼早期胚胎发育过程中septin6的功能研究,利用的技术为morpholino敲降技术。 在敲降septin6的实验组中,我们最早发现胚胎呈现身体弯曲,心包积水,头肾囊肿等一系列表型,在证实了MO有效的抑制了septin6的表达后,我们对造成该些表型的相关机制做了进一步探讨。我们利用原位杂交对早期调控胚胎器官形成进行检测,发现48小时的胚胎约70%呈现了中胚层和内胚层器官的反向定位。进一步研究发现,器官的定位是由体节发育时期Nodal信号通路决定的,通过对Nodal信号通路检测,发现该通路也呈现了侧板中胚层相反的定位。根据前人报道,nodal信号通路又是由于体节发育初期的库氏泡(Kupffersvesicle,KV)所调控的,我们又检测了KV的整体形态,并未发现明显异常,但KV内部的纤毛在长度和数量方面均显著减少。同时,利用septin抑制剂处理胚胎同样可以重复septin6敲降造成的表型。另外,结合KV的前体细胞中靶向敲降septin6实验和septin6免疫组化实验,最终,我们得出结论,septin6的敲降引起的器官定位的缺陷是由其在KV结构中执行的功能决定的。 本研究首次证明了septin基因家族在脊椎动物体内发育过程中的功能。同时,阐明了septin6在纤毛发生过程中起着重要的作用。