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【目的】研究天然化合物异硫氰酸苯已酯(PHI)体外对多发性骨髓瘤细胞株U266的增殖抑制作用,分析PHI对骨髓瘤细胞中甲基化转移酶(DNMT)的影响,探讨PHI抑制骨髓瘤细胞増殖的机制,为PHI作为一种新型的治疗多发性骨髓瘤药物提供实验依据。【方法】通过描绘细胞生长曲线、MTT的方法观察PHI对U266细胞的生长抑制情况;用DAPI染色观察PHI对细胞的促凋亡作用;用流式细胞技术分析PHI对U266细胞周期的影响,RT-PCR分析DNA甲基转移酶(DNMT)1、3a、3b在多发性骨髓瘤细胞株U266及正常人外周血单个核细胞中表达情况;通过RT-PCR技术分析不同浓度PHI作用U266细胞后DNMT1、3a、3b在细胞中的表达情况并使用类ELISA方法检测不同浓度PHI作用后细胞内DNMTs活性的变化;使用甲基化PCR技术分析P16基因在U266细胞中的甲基化状态,并观察PHI对U266细胞株P16基因甲基化状态的影响。【结果】1、RT-PCR结果显示DNMT1、3a、3b在骨髓瘤细胞株U266中均高表达,而在正常人细胞中低表达。使用1.25umol/L、2.5umol/L、5umol/L、10umol/LPHI处理U266细胞后,其增殖能力显著抑制,48小时抑制率分别为0.284±0.089、0.554±0.079、0.753±0.053、0.936±0.067(p<0.05),MTT结果得到IC50为2.48.2、DAPI染色显示细胞凋亡。3、对细胞周期分析结果显示,PHI抑制骨髓瘤细胞増殖,瘤细胞生长中止于G1期。4、PCR技术分析瘤细胞DNMTs表达,显示DNMTmRNA表达异常增高,RT-PCR显示:不同浓度的PHI处理细胞48小时后,与空白对照比,RT-PCR显示U266细胞内DNMT1、DNMT3a以及DNMT3b mRNA的表达下降(p<0.05)并呈浓度依赖性。5、使用ELISA技术检测瘤细胞中DNMT活性,发现PHI处理后DNMT活性显著抑制。6、使用甲基化PCR技术检测发现P16基因在U266细胞中高度甲基化,使用PHI处理后可使逆转P16基因的高甲基化状态。【结论】1、U266细胞中DNMT表达显著增高,与正常细胞显著差异。2、PHI处理骨髓瘤细胞株U266,显著抑制瘤细胞DNMT活性,诱导细胞凋亡,DNMTmRNA表达降低并成剂量依赖性。3、PHI可逆转在U266细胞中处于高甲基化状态的P16基因。4、DNMT可作为新的治疗骨髓瘤靶点,PHI是潜在的治疗骨髓瘤的新的制剂。