前言胃癌是一种严重危害人类健康，在国内外高发病的恶性肿瘤，其死亡率占据肿瘤死亡之首，而淋巴转移是胃癌的主要扩散途径，但目前胃癌淋巴转移的机制尚不明确。环氧化酶-2(cyclooxygenase-2，COX-2)为诱导基因，在胃癌等多种肿瘤中过度表达，参与肿瘤的发生和发展。血管内皮生长因子-C(vascular endothelial growth factor C，VEGF-C)是VEGF家族中的新成员，在淋巴管生成及淋巴结转移中起到重要作用。本研究采用免疫组化方法检测COX-2、VEGF-C在胃癌组织中的表达，观察新生淋巴管的形成，从而探讨他们与淋巴管生成、淋巴结转移之间的关系，为今后胃癌的防治工作提供了一个新思路。实验材料标本收集中国医科大学附属一院2002年9月-2004年10月之间资料完整的接受胃大部切除术的胃癌标本51例，均经病理组织学检查证实，所有标本术前均未接受非甾体抗炎药治疗及放化疗，取距癌灶5CM以上的癌旁非癌组织20例作为对照。HE染色后由病理学医师对组织学类型进行诊断。男性32例，女性19例，年龄38-80岁，平均59.74岁。其中高分化8例，中分化12例，低未分化31例；肠型22例，弥漫型29例；发生局部淋巴结转移者24例，无局部淋巴结转移者27例；上部癌8例，中部癌13例，下部癌30例；TNM分期在Ⅰ期8例，Ⅱ期15例，Ⅲ期10例，Ⅳ期18例。主要试剂鼠抗人COX-2单克隆抗体；兔抗人VEGF-C、VEGFR-3多克隆抗体；免疫组化SABC试剂盒和DAB显色液主要仪器Olympus光学显微镜、石蜡切片机、冰箱、微波炉实验方法方法采用免疫组化SABC法检测51例胃癌组织及20例癌旁组织中COX-2、VEGF-C及其受体VEGFR-3的表达，观察肿瘤组织新生淋巴管的生成状况。统计分析采用x~2检验，统计学处理采用SPSS10.0统计分析软件，P＜0.05有统计学意义。实验结果一、COX-2、VEGF-C和VEGFR-3在胃癌及癌旁组织中的表达COX-2和VEGF-C在胃癌组织中的阳性表达率分别为66.7％、52.9％，对照组即癌旁组织中未检出COX-2和VEEGF-C的表达。VEGFR-3的阳性产物定位于肿瘤间质新生淋巴管的内皮细胞胞浆中，有新生淋巴管形成的阳性表达率为54.9％，而成熟淋巴管内皮细胞、癌细胞及癌旁正常组织中未检出VEGFR-3的表达。二、COX-2、VEGF-C的表达与胃癌临床病理参数的关系51例胃癌组织中，COX-2在32例男性中有22例表达阳性，占68.8％；在19例女性中有12例表达阳性，占63.2％，两组间比较无统计学意义(x~2=0.17，P＞0.05)。VEGF-C在32例男性中有17例表达阳性，占53.1％；在19例女性中有10例表达阳性，占52.6％，两组间比较无统计学意义(x~2=0.012，P＞0.05)。51例胃癌组织中上部癌8例，中部癌13例，下部癌30例。其中COX-2的阳性表达率分别为75.0％、61.5％、66.7％，三组间比较无统计学意义(x~2=0.357，P＞0.05)。VEGF-C的阳性表达率分别为50.0％、61.5％、50.0％，三组间比较无统计学意义(x~2=0~51，P＞0.05)。在20例高中分化癌中有15例出现COX-2的阳性表达，阳性表达率为75.0％；31例低未分化癌中有19例出现COX-2的阳性表达，阳性表达率为61.3％，两组间比较无差异(x~2=1.03，P＞0.05)。在20例高中分化癌中有13例出现VEGF-C的阳性表达，阳性表达率为65.0％；31例低未分化癌中有14例出现VEGF-C的阳性表达，阳性表达率为45.2％，两组间比较无差异(x~2=1.92，P＞0.05)。按Lauren分型，肠型22例，有14例COX-2表达阳性，阳性表达率为63.6％；弥漫型29例，有20例COX-2表达阳性，(P＞0.05)阳性表达率为69.0％，两组间比较无统计学意义(x~2=0.16，P＞0.05)。同样在22例肠型胃癌中有9例VEGF-C表达阳性，阳性表达率为40.9％，在29例弥漫型胃癌中有18例VEGF-C表达阳性，阳性表达率为62.1％，两组间比较无统计学意义(x~2=0.04，P＞0.05)。51例胃癌组织中，有淋巴结转移的24例胃癌组织中有20例出现COX-2的阳性表达，阳性表达率为83.3％；无淋巴结转移的27例胃癌组织中有14例出现COX-2的阳性表达，阳性表达率为51.9％，两组间比较有显著的统计学意义(x~2=5.67，P＜0.05)。有淋巴结转移的24例胃癌组织中有18例出现VEGF-C的阳性表达，阳性表达率为75.0％；无淋巴结转移的27例胃癌组织中有9例出现VEGF-C的阳性表达，阳性表达率为33.3％，两组间比较有显著的统计学意义(x~2=8.85，P＜0.05)。51例胃癌组织中，TNM分期Ⅰ～Ⅱ期的有23例，Ⅲ～Ⅳ期的有28例，COX-2的阳性表达率分别为52.2％、78.6％，两组间比较有显著的统计学意义(x~2=3.95，P＜0.05)。VEGF-C的阳性表达率分别为34.8％、67.9％，两组间比较有显著的统计学意义(x~2=5.54，P＜0.05)。三、COX-2表达与VEGF-C表达的关系51例胃癌组织中，COX-2表达阳性者共34例，其中27例VEGF-C表达阳性者中有COX-2表达阳性的21例(77.8％)，24例VEGF-C表达阴性者中有COX-2表达阳性的13例(54.2％)，两组比较有统计学意义(x~2=3.19，P＜0.05)。四、COX-2、VEGF-C的表达与肿瘤新生淋巴管形成之间的关系51例胃癌组织中，34例COX-2表达阳性者中有23例出现新生淋巴管形成，占67.6％，17例COX-2表达阴性者中有5例出现新生淋巴管形成，占29.4％，二者比较有显著的统计学差异(x~2=6.69，P＜0.01)。27例VEGF-C表达阳性者中有20例出现新生淋巴管形成，占74.1％，24例VEGF-C表达阴性者中有8例出现新生淋巴管形成，占33.3％，二者比较有显著的统计学差异(x~2=8.51，P＜0.01)。讨论COX-2在大多数正常组织中不表达，一般只在诱导因子的作用下表达上调，这些诱导因子包括各种细胞因子、生长因子以及促癌因素等。COX-2在正常人的胃肠道组织中的免疫组化反应呈阴性，而主要分布于肿瘤和炎症组织，且多定位于分泌功能较强的细胞，在多种肿瘤组织中过度表达，参与肿瘤的发生和发展，它的过度表达增强了细胞癌变和转移的能力。VEGF-C主要产生于肿瘤细胞，其受体是VEGFR-3，主要表达于淋巴管内皮，VEGF-C由肿瘤细胞分泌后，经旁分泌形式作用于淋巴管内皮的受体VEGFR-3，使肿瘤细胞特异性地黏附到淋巴管内皮细胞上，促进淋巴管内皮细胞分化增生，并降低内皮细胞间的黏附，增加淋巴管的通透性，从而促进胃肠道肿瘤的淋巴管的转移。VEGF-C阳性胃癌组织中淋巴管数目明显多于阴性组织，癌细胞与淋巴管作用机会增加后，癌细胞容易侵入淋巴管，出现淋巴转移。VEGF-C在肿瘤中有较高水平的表达，且VEGF-C的表达与肿瘤内淋巴管密度、肿瘤淋巴结转移程度呈正相关。COX-2、VEGF-C的高表达均可促进胃癌的淋巴结转移。COX-2能促进癌细胞的增殖、抑制其凋亡，同时COX-2可促进肿瘤新生血管的形成，为癌细胞的生长、浸润提供氧和营养物质。而VEGF-C可促进淋巴内皮细胞的增殖，降低内皮细胞间的黏附力，增强淋巴管的通透性，为癌细胞侵入淋巴管创造条件。两者在胃癌淋巴结转移中起协同作用，在它们的共同作用下癌细胞的侵袭力及向淋巴管的渗透能力增强，这样癌细胞更容易转移至局部淋巴结并增生形成转移灶。本研究用免疫组化方法表明了胃癌中存在COX-2与VEGF-C的过度表达，与胃癌的淋巴结转移、临床TNM分期相关，与患者性别、肿瘤部位、分化程度及Lauren分型无关，且二者与胃癌新生淋巴管生成、淋巴结转移呈明显相关。这为今后防治胃癌淋巴结转移提供了一个新思路。结论1．COX-2、VEGF-C、VEGFR-3在胃癌组织中高表达，与胃癌淋巴结转移、临床TNM分期有关，与患者性别、肿瘤部位、分化程度及Lauren分型无关。2．COX-2、VEGF-C的表达与胃癌新生淋巴管的生成、淋巴结转移呈明显相关。