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脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus,EMCV)是一种重要的人畜共患病病原，会引起猪和某些哺乳动物、啮齿动物乃至灵长类动物的一种以脑炎、心肌炎或心肌周围炎为主要特征的急性传染病。EMCV可感染多种哺乳动物、鸟类、昆虫和人类，对多种实验动物宿主有高度传染性。啮齿动物感染EMCV，没有明显的病理变化。自然条件下，EMCV感染最广泛和最严重的动物是猪，感染后可造成突然死亡和实质器官的广泛病理损伤，母猪感染还可造成繁殖障碍。EMCV在分类上属小RNA病毒科，心肌病毒属，是一种无囊膜的单股正链RNA病毒。病毒粒子直径27nm，20面体对称，外表光滑呈球形。蛋白衣壳由60个衣壳粒子组成，每个衣壳粒子含有4种结构蛋白，即VP1、VP2、VP3和VP4。其中VPl的抗原性最强，且与病毒粒子表面的拓扑结构、抗原性、受体吸附以及脱壳有关。本实验在分析脑心肌炎病毒VPl蛋白抗原表位的基础上人工合成一段含VPl抗原表位的双链DNA序列(150bp)，克隆于原核表达载体pGEX-6p-1，经酶切鉴定后转化大肠杆菌(E.coli)BL21感受态细胞，以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白。经GSTrap FF亲和层析柱过柱获得纯化蛋白，经SDS-PAGE电泳显示相对分子质量为30800。Western-blot分析结果表明，该重组蛋白具有较强的反应原性。测定其浓度后，于-20℃保存。为了探讨该蛋白的免疫原性，将该纯化蛋白免疫小鼠，获得的血清效价大于为1:12800，经GST蛋白孵育后效价为1:800。Western-b1ot结果显示该融合蛋白与经过空载体pGEX-6p-1表达的GST蛋白孵育的抗血清反应后有明显的特异性条带。这表明所获得的纯化后的蛋白具有良好的抗原性。 利用该重组抗原，建立了检测猪脑心肌炎病毒血清抗体的间接ELISA诊断方法。经研究确定：0.05mol／1，pH 9.6的碳酸盐缓冲液作为包被液；抗原最适包被浓度为2μg／mL，血清最适稀释度为1:50，其作用时间为90min，酶标抗体最适稀释度为1:20000，最适作用时间为30min，判定标准为样品的OD<,450>≥0.427为阳性，OD<,450>≤0.35为阴性，介于二者之间为可疑。该方法与PRRSV、猪瘟、PCV2、FMDV抗体反应呈阴性，证明具有良好的特异性。应用该方法检测了来自我国不同地区的26家猪场的156份临床血清，结果证明我国部分规模化猪场已有猪脑心肌炎疾病存在。