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第一部分七氟醚后处理减轻离体大鼠心肌缺血再灌注损伤目的通过对比心肌I/R前后血液动力学参数、凋亡和梗死面积,探讨七氟醚后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法建立大鼠心脏Langendorff离体心脏灌流模型,取制备离体模型成功的心脏32个,分为4组(n=8):假手术组(SHAM组),单纯七氟醚组(S组),单纯缺血再灌注组(I/R组),七氟醚后处理组(SEVOP组)。(1)SHAM组:K-H液持续灌注180 min;(2)S组:K-H液持续灌注60 min,且于60min时给予含2.5%七氟醚(批号:2217,丸石制药株氏会社,日本)的K-H液灌注15 min,继续K-H液灌注105 min;(3)I/R组:平衡30 min,缺血30 min,再灌注120 min;(4)SEV0P组:于再灌注初给予含2.5%七氟醚的K-H液灌注15 min;记录各组血液动力学参数;TUNEL法检测细胞凋亡部分;TTC法计算心肌梗死面积;Western blot测Bcl-2、Caspase-3的蛋白表达。结果与T0比,I/R和SEVOP组在T1、T2、T3、T4时点LVSP、HR、±dp/dtmax、降低(P<0.05),LVEDP升高(P<0.05);在T1、T2、T3、T4时刻,与SHAM组比较,I/R和SEVOP组LVSP、HR、±dp/dtma降低,LVEDP升高(P<0.05);与I/R组比较,SEVOP组LVSP、HR、±dp/dtma升高,LVEDP降低(P<0.05)。与I/R组(51±5)%相比,SEVOP组(31±4)%的心肌梗死范围缩小(P<0.05)。TUNEL法染色结果示,与SHAM组相比,I/R组及SEVOP组心肌细胞TUNEL染色阳性细胞增多,TUNEL凋亡指数增高(P<0.05);与I/R组比,SEVOP组心肌细胞TUNEL染色阳性细胞较少,凋亡指数较低(P<0.05)。与SHAM组相比,I/R组及SEVOP组心肌Bcl-2蛋白表达下降,Caspase-3表达增加,差别有统计学意义。(P<0.05);与I/R组比,SEVOP组心肌Bcl-2蛋白表达升高,Caspase-3表达下降,差别有统计学意义。(P<0.05)结论七氟醚后处理后大鼠左室舒张功能增加,心肌收缩力增强,心功能改善明显;七氟醚后处理能抑制心肌细胞凋亡,减小梗死面积,减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤。第二部分七氟醚后处理减轻离体大鼠心肌缺血再灌注损伤的分子机制:NOS/NO-NHE1-MPTP途径目的通过心肌I/R后,七氟醚后处理,用或不用L-NAME后NOS/NO、NHE1/p-NHE1、和NAD+含量变化,探讨七氟醚后处理离体大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用的分子机制。方法Langendorff灌流模型成功的雄性SD大鼠离体心脏72个,采用随机数字表法,将其分为6组(n=12):假手术组(S组):连续用K-H液灌注180 min;七氟醚组(Sev组):K-H液灌注60 min后,用含2.5%七氟醚的K-H液灌注15 min,再用K-H液灌注105 min;缺血再灌注组(I/R组):K-H液灌注30 min后,停灌30 min,再灌注120min,制备心肌缺血再灌注损伤模型;七氟醚后处理组(SEVOP组):K-H液灌注30 min后,停灌30 min,于再灌注开始即刻用含2.5%七氟醚的K-H液灌注15 min,随后再用K-H液灌注105 min;七氟醚后处理+NOS抑制剂旋硝基精氨酸甲基酯(L-NAME)组(SEVOP+L-NAME组):再灌注开始用含浓度为100μmol/L L-NAME的K-H液灌注60 min(再灌注开始同时注入K-H液2.5%七氟醚并维持15分钟),随后再K-H液灌注60 min;NOS抑制剂旋硝基精氨酸甲基酯(L-NAME)组(L组):再灌注开始即刻用含浓度为100μmol/L L-NAME的K-H液灌注60 min,再换用上述单纯K-H液灌注60 min;于再灌注2 h时取心肌组织,采用分光光度法检测NO、NAD+含量和NOS活性,Western Blot法测定总NHE1(t-NHE1)和磷酸化NHE1(p-NHE1)的表达,RT-PCR法测定NHE1 m RNA的表达水平,并测定心肌梗死体积,观察心肌超微结构。结果与S组比较,I/R组、SEVOP组、SEVOP+L-NAME组和L组心肌梗死体积增大,心肌组织NO、NOS和NAD+水平降低,p-NHE1及NHE1 m RNA表达上调(P<0.05),Sev组上述指标差异无统计学意义(P>0.05);与I/R组比较,SEVOP组心肌梗死体积减小,心肌组织NO、NOS和NAD+水平升高,p-NHE1及NHE1 m RNA表达下调(P<0.05),SEVOP+L-NAME组和L组上述指标差异无统计学意义(P>0.05);与SEVOP组比较,SEVOP+L-NAME组和L组心肌梗死体积增大,心肌组织NO、NOS和NAD+水平降低,p-NHE1及NHE1 m RNA表达上调(P<0.05)。SEVOP组心肌病理学损伤较I/R组和SEVOP+L-NAME组减轻。结论七氟醚后处理可能通过增强心肌NOS活性,促进NO合成,抑制NHE1功能,减少MPTP开放,从而减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤。第三部分七氟醚后处理对离体大鼠缺血再灌注心肌胀亡和自噬的影响目的观察七氟醚后处理对大鼠心肌胀亡和自噬活动的影响。方法建立大鼠心脏Langendorff离体心脏灌流模型,取制备离体模型成功的心脏32个,分为4组(n=8):假手术组(SHAM组),单纯七氟醚组(S组),单纯缺血再灌注组(I/R组),七氟醚后处理组(SEVOP组),各组处理方法同第一部分。透射电镜观察细胞胀亡和自噬;Western blot测自噬相关分子LC3I、LC3II,Beclin-1和胀亡相关分子porimin的蛋白表达。结果Sham组自噬小体数目是1.2±0.7,胀亡细胞数是3.2±1.5;S组自噬小体的数目是1.0±0.6,胀亡细胞数是3.0±1.3,两组对比,无统计学差异。而在缺血再灌注组,I/R组自噬小体数目是10.4±2.4,胀亡细胞数是15.5±4.2;七氟醚后处理组SEVOP组自噬小体的数目是6.8±1.8,胀亡细胞数是11.7±3.5表明缺血再灌注后自噬小体和胀亡细胞数目显著增加,而七氟醚后处理能显著减少噬小体和胀亡细胞生成的数目。结论单独使用七氟醚不影响自噬小体和胀亡细胞数目,缺血再灌注后自噬小体和胀亡细胞数目显著增加,而七氟醚后处理能显著减少自噬小体和胀亡细胞生成的数目。