细胞凋亡是一种主动的细胞生理性死亡方式，通过细胞凋亡，生物体能祛除有害、过剩和衰老的细胞，维持机体正常的细胞数量和结构。现已明确，肿瘤的发生发展与细胞凋亡机制障碍、凋亡耐受更为密切相关。从某种程度上来说，肿瘤治疗即是诱导凋亡的治疗。在经典的阿霉素、柔红霉素、放射线引起的细胞凋亡中，均检测到胞内神经酰胺含量的增高。自确认神经酰胺为脂质第二信使以来，已有大量鞘脂与细胞凋亡调控的研究，但是由于鞘脂结构复杂和认识该类物质时间较短，因此调控机制的认识上还有许多空白。近年发现的过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)，在细胞凋亡调控中也显示出重要作用。又因PPAR在调控脂质代谢、肿瘤基因表达等方面起重要的纽带作用。因此，本实验着眼于从一个新的角度研究鞘脂类物质调节细胞凋亡的机制，即，在进一步研究鞘脂与PPAR对细胞凋亡调控机制的基础上，研究鞘脂与PPAR的相互作用及其在细胞凋亡调控中的作用。并获得了如下的结果： 首先研究了鞘脂对细胞凋亡调控的影响，以肝癌细胞Be17402作为模型，着重研究神经酰胺在凋亡促进时，与处理时间、半胱天冬酶caspases、MAPK信号途径、细胞周期依赖激酶、核因子NFκB之间的关系。结果如下：(1)神经酰胺可显著抑制生长、促进细胞凋亡，同时伴有细胞周期中S期细胞比例的减少；(2)确定了CDK7在神经酰胺抑制细胞生长中的重要作用，发现神经酰胺通过显著抑制CDK7的表达来抑制细胞生长。(3)对处理不同时期的凋亡机制研究中，发现神经酰胺短期、长期处理肿瘤细胞，均可抑制细胞生长、促进细胞凋亡。但是两种处理诱导的细胞凋亡机制有明显差别：A．短期处理中，缺乏经典细胞凋亡的生物学特征，进一步证实该时期的细胞凋亡以caspase-非依赖性方式存在。并且短期处理中，对P38MAPK蛋白的磷酸化有显著性的激活；B长期处理中，出现典型的细胞凋亡的形态学和生物学性状，并证明caspase-依赖性的凋亡途径起重要作用。而P38MAPK在该时期作用不大。另外，证实caspase-非依赖的凋亡也存在于长期处理诱导的细胞凋亡中。(4)另外，研究还发现神经酰胺可激活NFκB的表达并使之在细胞内的分布发生改变，但具体的调控机制及生理意义尚不清楚。 其次，研究了PPAR与细胞凋亡调控的关系。利用PPARγ的药理性配体，着重研究PPARγ配体在促进凋亡时，与半胱天冬酶caspases、细胞周期调控、PPARγ的激活之间的关系。结果如下：(1)PPARγ的配体曲格列酮可显著抑制生长、促进细胞凋亡，同时伴有细胞周期中G0／G1期细胞比例的增加；(2)PPARγ的配体环格列酮也可显著促进细胞凋亡，而且该凋亡作用是caspase依赖性的；(3)PPARγ的配体均可显著性的激活PPARγ的转录活性，该激活作用可被GW9662有效抑制；(4)PPARγ的配体环格列酮诱导的细胞凋亡可被GW9662有效抑制。 最后，研究了鞘脂与PPAR相互作用模式及在细胞凋亡调控中的作用。结果如下：(1)C2-，C8-神经酰胺以剂量依赖性的方式下调肿瘤细胞中的PPARγ的mRNA水平和蛋白水平的表达量。但具体调控机制尚有待研究；(2)C2-，C8-神经酰胺下调PPARγ蛋白表达量的作用可被GW9662显著抑制：(3)C2-，C8-神经酰胺可显著性的激活PPARγ的转录活性；(4)GW9662显著抑制神中国农业大学博士学位论文 中文摘要一 经酚胺激活的 PPARY转录活性；（5）CZ－，CS一神经酞胺具有的极强的促进细胞凋亡的作用被 GW9662显著抑制；（6）CZ－，CS一神经酝胺极强的抑制CDK7表达量的作用被GW9662显著抑制。 （7）最后，发现ERK和c－myc信号通路在神经酝胺的凋亡调控中起重要作用。 总之，本实验深入研究了神经酚胺和 PPARY在调控细胞凋亡方面的机制，在细胞凋亡调控 中获得了新的认识。如神经酸胺短期、长期处理细胞诱导的凋亡机制显著不同；PPART的配体 环格列酮诱导细胞凋亡以＊M即依赖性和。％p一依赖性的方式发生：神经酝胺抑制细胞周期 在S期，而曲格列酮在G0lGI期等。尤其重要的是，本实验首次在细胞凋亡调控中，研究神经 酝胺与PPARY的相互作用，并且初步揭示该种作用在细胞调控中的作用，并由此提出神经酸胺 与过氧化物酶体增殖物激活受体在细胞凋亡调控中存在上下游关系的假说，认为以 PPAR激活 依赖性的方式是神经酚胺促进恶性肿瘤细胞的凋亡的一条重要途径。＠