论文部分内容阅读
多肽是一种具有良好营养和保健功能的物质。可通过酸、碱或酶水解蛋白质获得的，其中以酶法水解最好。但酶解蛋白水解液有苦味，严重的影响了产品的口感，因此水解液脱苦成了现代工业生产急需解决的问题。由于微生物脱苦具有明显的优越性，因此寻找一种成功脱苦的微生物成为我们目前迫切需要解决的课题之一。本论文包括四个方面的内容：1．将供试的安全菌株毛霉、黑曲霉、栖土曲霉和从自然发酵的豆酱中分离得到3株蛋白酶高产菌株M1、M2、M3在各自的固、液体发酵培养基中培养，测定各菌株所产蛋白酶活力。用这几株菌的粗酶液作用于苦味肽，M3和毛霉的粗酶液能明显降低苦味肽的苦味，而黑曲霉和栖土曲霉3.942的粗酶液对苦昧的脱除没什么作用。因此选择蛋白酶活力高且粗酶液能脱苦的M3为目的菌株。根据M3菌株的菌落形态和菌体形态确定它属于曲霉属。2．对曲霉M3的产酶条件进行研究，其最佳产酶条件是：M3在培养基组成为麸皮：葡萄糖：水=9：1：5的条件下，接种量为6％，28℃培养72hr后用蒸馏水浸提，所得酶液的中性蛋白酶活力高达12608.52u／g干曲。用硫酸铵沉降法获得蛋白酶粉，对其酶学性质进行研究发现：该酶的最适反应温度为50℃，在30～40℃时具有良好的热稳定性；最适作用PH值为7.5，在PH值6.5～7.5的条件下酶是稳定的；NH41+，K1+对该蛋白酶有明显的激活作用，Fe3+则对其表现出强烈的抑制作用。3．用曲霉M3蛋白酶水解大豆分离蛋白，对最佳预处理条件和酶解工艺条件进行了研究。结果表明：其最佳预处理条件为：80℃水浴处理10min；最佳酶解条件为：底物浓度5％（W／V）、加酶量4200u／g蛋白、温度50℃、pH7.5。在此条件下水解，测定不同水解时间的水解度，并品尝苦味。研究发现：曲霉M3蛋白酶水解液的水解度随着水解时间的延长而增大，且在任何水解时间水解液都没有苦味。4．以曲霉M3为出发菌株，用紫外线和亚硝基胍复合诱变，筛选出了一株变异株N43。该菌株产蛋白酶能力较出发菌株提高了146％，而且其遗传稳定性比较好。用N43所产蛋白酶水解大豆分离蛋白得到的水解液也没有苦味。