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猪链球菌(Streptococcus suis, S. suis)是导致猪链球菌病主要的病原。该菌可分为33个血清型,其中猪2型链球菌(Streptococcus suis type 2, SS2)致病性强、流行最广泛。在临床上,该型亦是分离频率最高的血清型之一。SS2可引起猪的脑膜炎、化脓性肺炎和心肌炎等疾病。此菌亦可通过特定的传播途径感染人,是一种重要的人畜共患病病原。马链球菌兽疫亚种(Streptococcus equi subsp. Zooepidemicus, SEZ)属于C群链球菌,可引起多种动物感染发病。临床症状主要表现为败血症、脑膜炎和关节炎等,一般呈地方性流行。人类可因摄取被该菌污染的牛奶等食品,或者与病猪或病马等动物接触,而引发该病。流行病学调查表明,在我国除新出现的猪链球菌2型外,马链球菌兽疫亚种仍是我国各地猪链球菌病的主要病原。灭活疫苗对于预防猪链球菌病同种血清型的菌株有良好的保护力,但不同血清型之间的交叉保护力却很差,因此新型疫苗的研制成为研究的热点。随着新的毒力因子和免疫保护力蛋白的不断发现,为开发新型的基因工程疫苗的研究带来了新的希望,对防治猪链球菌病提供了新的前景。为了解猪链球菌病,本实验室对四川分离株SC19菌株的特性进行了研究,为筛选疫苗候选株打下基础。在新型疫苗的研究中,以马链球菌兽疫亚种弱毒疫苗株ST171(在中国已使用达20年之久,对SEZ的防治起到了一定的作用。)作为出发菌株,表达猪2型链球菌的免疫原性蛋白,以期得到马链球菌兽疫亚种-猪链球菌2型二价弱毒活疫苗。现将主要研究结果报告如下:1.猪链球菌2型SC-19中国流行株的特性研究对中国分离株SC19的特性进行了研究,鉴定此菌株基因表型为mrp+epf+sly+,在绵阳血平板上是β溶血。可使Balb/c小鼠、昆明鼠、家兔和仔猪感染发病,对仔猪敏感。感染猪链球菌2型SC19的仔猪多超急性死亡,症状以脑膜脑炎型和关节炎型为主,与北美株报道的临床及病理变化一致。细菌多分布于蛛网膜下腔的中性粒细胞的细胞浆中,对脑组织有组织嗜性,可推测细菌作用于中性粒细胞。溶血素作为链球菌的毒力因子,在猪体内被细菌高量的表达,说明溶血素的表达对于链球菌具有重要意义。溶血素单抗与组织的阳性结果也集中于中性粒细胞的细胞浆内,说明溶血素对于细菌粘附或入侵炎性细胞有一定的作用。2.马链球菌兽疫亚种-猪链球菌2型弱毒活疫苗的研究以马链球菌兽疫亚种弱毒疫苗株ST171为出发菌株,构建了可以表达猪2型链球菌免疫原性蛋白溶菌酶释放蛋白(MRP),表面蛋白1(SAO)和假设蛋白0197(HP0197)的重组菌ST171-MRP, ST171-SAO和ST171-HP0197。Western blot检测证明2型的免疫原性蛋白在ST171中有良好的表达。小鼠免疫保护力试验证明这三组重组菌均能诱导产生特异的SEZ抗体,对SEZ致死剂量的攻击,均能提供良好的保护力。而且三组重组菌能诱导产生特异的SS2免疫原性蛋白的抗体和有效诱导细胞免疫应答,对SS2致死剂量的攻击,能提供部分保护力。仔猪免疫保护力试验证明2组重组菌ST171-SAO和ST171-HP0197能诱导产生特异的SEZ抗体,对SEZ致死剂量的攻击,均能提供良好的保护力。而且2组重组菌能诱导产生特异的SS2免疫原性蛋白的抗体和细胞免疫应答,对SS2致死剂量的攻击,能提供部分保护力。这些结果均证明ST171-MRP, ST171-SAO,ST171-0197有望被开发为马链球菌兽疫亚种-猪链球菌2型二价弱毒疫苗。