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卵母细胞胞浆内单精子注射(ICSI)技术已经在许多物种上获得成功，但目前ICSI的效率仍然较低，ICSI的成功率受许多因素影响，本研究借助显微操作仪将牛精子注入经体外成熟22—26h的牛卵母细胞质内，并对注射卵进行体外培养，观察其存活及发育情况，探讨了显微操作注射针、肝素、卵母细胞成熟时间及离心与否、精子状态及预处理对牛ICSI胚胎体外发育的影响，研究结果如下：试验一，用外径为3—5μm的注射针进行显微操作的注射卵存活率、卵裂率和囊胚率均显著高于8—10μm注射针处理组(84.80％vs76.56％，57.55％vs45.92％，22.64％vs14.29％)(p＜0.05)，表明用外径为3—5μm的注射针进行显微操作的效率高于用8—10μm注射针进行注射。试验二，在受精液或胚胎培养液中添加肝素处理组的注射卵卵裂率和囊胚率分别为56.88％和54.31％以及22.94％和18.97％，显著高于在上述两种培养基中均不添加肝素处理组的注射卵卵裂率和囊胚率(35.79％和8.42％)(p＜0.05)，表明在受精液或胚胎培养液中添加肝素能够显著提高牛ICSI效率。但与只在受精液或胚胎培养液中添加肝素相比，在两种培养基中均添加肝素并不能提高注射卵的卵裂率和囊胚率(57.14％vs56.88％和54.31％，21.43％vs22.94％和18.97％)(p＞0.05)。试验三，卵母细胞体外成熟24h或26h后再进行显微注射，其注射卵的卵裂率和囊胚率均显著高于体外成熟22h处理组的注射卵卵裂率和囊胚率(54.55％和56.19％vs42.06％，22.73％和23.81％vs12.15％)(p＜0.05)；但卵母细胞体外成熟24h或26h处理组的注射卵卵裂率及囊胚率没有显著差异(54.55％vs56.19％，22.73％vs23.81％)(p＞0.05)，表明用体外成熟24—26h的卵母细胞进行显微注射能够提高牛ICSI效率。试验四，注射精子头处理组能够获得比注射活精子或死精子处理组更高的注射卵存活率(93.16％vs80.95％、84.21％)(p＜0.05)；注射活精子处理组的注射卵卵裂率和囊胚率显著高于注射死精子和精子头处理组(57.84％vs42.71％和41.28％，21.57％vs12.5％和9.52％)(p＜0.05)；但注射死精子处理组与注射精子头处理组之间的注射卵卵裂率和囊胚率没有显著差异(42.71％vs41.28％，12.5％vs9.52％)(p＞0.05)，因此，为了获得较高的ICSI胚胎发育率，应选择整个活精子进行显微注射。试验五的研究结果表明，卵母细胞离心对牛ICSI注射卵的存活率以及卵裂率和囊胚率均没有显著影响(85.16％vs87.12％，52.29％vs54.78％，21.10％vs18.02％)(p＞0.05)。试验六的研究结果表明，对精子用DTT进行预处理可以显著提高ICSI注射卵的卵裂率和囊胚率(62.81％vs54.05％，28.10％vs18.02％)(p＜0.05)。