论文部分内容阅读
目的：本实验通过应用刺激性CpG-ODN和抑制性-ODN，观察其对系统性红斑狼疮（SLE）患者和正常健康人外周血单个核细胞中B淋巴细胞内TLR9的表达及IFN-α分泌的影响,进一步探讨免疫调节性寡聚脱氧核苷酸在SLE中的作用机制，为研究和开发新型的免疫调节剂在SLE的临床应用提供理论依据。方法：选取SLE患者60例和正常健康人20例，抽取外周静脉血约10ml.，分离外周血单个核细胞，分为三组体外培养，空白对照组加入RPMI-1640，实验组分别加入刺激性CpG-ODN及刺激性和抑制性-ODN，共同培养48小时后提取细胞及培养上清液，应用流式细胞仪检测培养后各组外周血CD19+B淋巴细胞内TLR9表达，用ELISA方法检测PBMC培养上清中IFN-α的浓度，分别比较各组之间TLR9的表达及IFN-α的分泌有无差异。收集患者临床资料并计算SLE疾病活动指数（SLEDAI）评分，根据SLEDAI评分将SLE患者组分为轻度活动组（30例，SLEDAI评分＜10）和中重度活动组（30例，SLEDAI评分≥10），进一步分别比较轻度活动组和中重度活动组在三组间TLR9表达水平和IFN-α的浓度差异。结果：1.应用流式细胞仪对60例SLE患者及20例正常健康人的PBMC中CD19+B淋巴细胞内TLR9+细胞的测定结果显示：①在SLE患者中，刺激组19.51±11.23（%）高于空白对照组11.71±9.62（%），抑制组15.04±7.91（%）低于刺激组19.51±11.23（%），两组之间的差异均有统计学意义（p<0.001,p=0.011）；抑制组15.04±7.91（%）高于空白对照组11.71±9.62（%），但两者无统计学意义（p=0.057）；而平均荧光强度（MFI）各组间均没有明显差异；②将SLE患者组按SLEDAI评分分为轻度活动组与中重度活动组，所得的结果与①一致；③在正常健康人中，刺激组11.59±4.83（%）高于空白对照组5.43±3.33（%），抑制组7.77±4.49（%）低于刺激组11.59±4.83（%），差异均有统计学意义(p<0.001, p=0.006)；抑制组7.77±4.49（%）虽高于空白对照组5.43±3.33（%），但差异无统计学意义（p=0.088）；平均荧光强度（MFI）刺激组与抑制组均高于空白对照组，且均有统计学意义，但刺激组和抑制组两者之间没有明显差异。2.刺激性CpG-ODN和抑制性-ODN与PBMC体外培养后IFN-α的分泌情况：①在SLE患者中，刺激组6.98±0.39（μg/ml）高于空白对照组4.53±0.32（μg/ml），抑制组4.63±0.34（μg/ml）低于刺激组6.98±0.39（μg/ml），差异均有统计学意义（p<0.001）；抑制组高于空白对照组，但两者差异无统计学意义（p=0.102）；②将SLE患者组按SLEDAI评分分为轻度活动组与中重度活动组，所得的结果与①一致；③在正常健康人中，刺激组4.06±0.19（μg/ml）高于空白对照组1.44±0.15（μg/ml），抑制组1.55±0.19（μg/ml）低于刺激组4.06±0.19（μg/ml），差异均有统计学意义(p<0.001)；抑制组1.55±0.19（μg/ml）高于空白对照组1.44±0.15（μg/ml），但差异无统计学意义（p=0.060）。3.培养上清IFN-α水平与B淋巴细胞内TLR9表达的相关性分析：PBMC培养上清中IFN-α与B淋巴细胞内TLR9表达呈正相关，相关系数为0.332（P<0.001）。结论：在SLE患者和正常人体外研究中，刺激性CpG-ODN可以使PBMC中B淋巴细胞内TLR9的表达上调及细胞中IFN-α的分泌增加，而抑制性-ODN则可以通过抑制细胞内TLR9的表达而阻断CpG-ODN的这种免疫刺激作用。提示细菌或病毒中所含的具有免疫刺激性DNA在SLE的发病过程中可能起着重要的作用，TLR9是一个潜在的免疫干预治疗靶点，深入研究抑制性-ODN可以有望使之成为一种新型的治疗手段应用于SLE的治疗。