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在兽医临床中,母犬乳腺肿瘤是一种常见的肿瘤疾病。犬乳腺肿瘤在病因、组织学特性、治疗方法及预后等方面与人乳腺肿瘤很相似。因此,犬的自发性肿瘤可作为人医乳腺肿瘤的模型。本试验采用病理组织学、免疫组化、分子生物学等方法,就与肿瘤生长发育密切相关的紧密连接蛋白(Claudin-1)、上皮细胞钙粘蛋白(E-cadherin)、肿瘤坏死因子(TNF-α)等在自然发生的乳腺肿瘤组织中的表达及其意义进行研究,以期对临床犬乳腺肿瘤疾病的诊断与治疗提供理论依据。1.Claudin-1、E-cadherin在犬乳腺肿瘤组织中的表达本试验对外科手术摘除的10个疑似犬乳腺肿瘤样本采用病理组织学观察进行分类后,利用T抗Claudin-1和E-cadherin抗体对病料组织进行免疫组织化学检测,并对抗体表达和病理类型进行比较。结果表明,在所检的乳腺肿瘤中,恶性乳腺肿瘤占60%,其中乳腺浸润性导管癌占40%；良性肿瘤占20%,而乳腺非肿瘤性疾病占20%。Claudin-1多克隆抗体在非肿瘤组织和良性乳腺肿瘤组织中的表达明显高于恶性乳腺肿瘤组织,差异极显著；Claudin-1蛋白在乳腺癌组织中表达的阳性率为(2/6,33.3%),显著低于正常乳腺组织100.0%(2/2)；恶性乳腺组织中E-cadherin表达的阳性率为33.3%(2/6),明显低于正常乳腺组织100%(2/2)。Claudin-1和E-cadherin在恶性肿瘤中均表达下调。2.酶联免疫吸附法测定乳腺肿瘤患犬血清中TNF-α的变化TNF-α与肿瘤的发生发展有着密切的关系,目前还没有相关的研究。本试验使用ELISA方法系统检测了拉布拉多、史宾格、德国牧羊犬这三个品种母犬(均选取3-5岁)在健康状态下的TNF-α浓度,以及乳腺肿瘤患犬血清中TNF-α浓度。试验结果显示,三个品种健康母犬血清TNF-α浓度范围(21.35±4.96pg/ml),品种之间没有显著性差异。犬种对血清中TNF-α含量变化影响不大,(P>0.05)无统计学差异；但乳腺肿瘤患犬血清中TNF-α含量明显高于健康犬血清中TNF-α含量。3.PCR法检测Claudin-1、E-cadherin、TNF-α的基因表达本试验建立了PCR法检测Claudin-1、E-cadherin、TNF-α的基因表达。从分子生物学方面检测犬正常乳腺与乳腺肿瘤组织中Claudin-1、E-cadherin、的基因表达差异,以及血清中TNF-α的基因表达。结果与试验一、二中结论基本一致,Claudin-1、E-cadherin在正常乳腺中大量表达,而在恶性肿瘤中表达极少,几乎没有表达,没有条带出现(如图3-2,3-3)。TNF-α在恶性肿瘤患犬中和健康犬与良性肿瘤患犬中均有表达(如图3-4)。临床中通过检测Claudin-1、E-cadherin、TNF-α的基因表达也可以为诊断与治疗犬乳腺肿瘤提供理论依据。