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微生物除草剂因具有环境相容性好、安全性高等优点而受到研究者的普遍关注。瓜果腐霉(Pythium aphanidermatum)属于一种卵菌,寄主范围较广,可引起多种植物的猝倒病和瓜果腐烂病。本实验室在前期研究中发现,瓜果腐霉的粗毒素具有较强的除草活性。本研究以分离自黄瓜的瓜果腐霉PAC菌株为试验材料,对其液体培养的滤液和菌丝进行了分离和纯化,旨在获得除草活性物质。1.培养滤液粗提物分别选用不同比例的乙酸乙酯和石油醚混合液作为展开剂(V/V=4:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3、1:4)进行硅胶柱层析,每个比例按每50 mL收集为一个馏分,共收集20个馏分。茎叶处理和种子萌发试验结果显示,两种溶剂3:1时分离效果较好,其中馏分8对马唐的抑制作用达到了3级,对马唐种子萌发的抑制作用为13.64%。2.对菌丝的乙酸乙酯粗提物进行硅胶柱层析,分别用乙酸乙酯和石油醚混合液作为展开剂(V/V=4:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3、1:4),每个比例按每50 mL收集为一个馏分,共收集20个馏分,茎叶处理和种子萌发试验结果显示,乙酸乙酯和石油醚4:1时分离效果较好,其中馏分11对马唐的抑制作用达到了3级,对马唐种子萌发的抑制作用为17.39%。3.对菌丝的甲醇粗提物进行硅胶柱层析,分别用乙酸乙酯和石油醚混合液作为展开剂(V/V=4:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3、1:4),每个比例都是每50 mL收集为一个馏分,共收集20个馏分,茎叶处理和种子萌发试验结果显示,乙酸乙酯和石油醚1:4时分离效果较好,其中馏分4其对马唐的抑制作用达到了5级,对马唐种子萌发的抑制作用为68.97%。4.石油醚和乙酸乙酯3:1洗脱后,再用2:1进行梯度洗脱,每50 mL收集为一个馏分,共收集到40个馏分。生物测定结果表明,梯度洗脱得到的馏分21~24对供试杂草马唐表现出了较强的活性,其对马唐的生长抑制作用均为4级。合并馏分21~24,以乙酸乙酯:石油醚2:1的混合液为展开剂进行等度洗脱,每50 mL收集为一个馏分,共收集到20个馏分。生物测定结果表明,馏分3对马唐有较强的抑制活性。5.HPLC分析发现,该馏分主要含有3个组分,其保留时间分别为12.7 min、14.0 min和30.5 min。质谱分析结果表明,保留时间为14.0 min时的组分其可能的分子式为C24H35N3O3和C20H23N9O3,30.5 min时的组分可能的分子式为C22H25N6O4,C19H37N6O2和C22H33N6O2。