【摘 要】
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颗粒细胞的脂质代谢对卵泡发育至关重要,而DGAT1/2（二酰甘油酰基转移酶）是合成甘油三酯的关键限速酶,在脂质代谢调控中具有重要的作用。但目前关于DGAT1/2在卵泡发育中的作用还没有相关报道。我们前期的研究发现,DGAT1随着鹅卵泡直径的增加在颗粒层中的mRNA表达量逐渐增加,而DGAT2呈现出相反的表达模式,且两者在等级前和等级卵泡的表达水平存在显著差异,推测DGAT1/2对鹅卵泡类固醇激素合
【基金项目】
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畜禽遗传资源发掘与创新利用四川省重点实验室自主研究课题（SNDK-ZZ-201703）； 国家自然科学基金项目,鹅颗粒细胞脂肪酸合成对卵泡发育的影响及作用研究（31672424）；
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颗粒细胞的脂质代谢对卵泡发育至关重要,而DGAT1/2（二酰甘油酰基转移酶）是合成甘油三酯的关键限速酶,在脂质代谢调控中具有重要的作用。但目前关于DGAT1/2在卵泡发育中的作用还没有相关报道。我们前期的研究发现,DGAT1随着鹅卵泡直径的增加在颗粒层中的mRNA表达量逐渐增加,而DGAT2呈现出相反的表达模式,且两者在等级前和等级卵泡的表达水平存在显著差异,推测DGAT1/2对鹅卵泡类固醇激素合成具有不同的调控作用。为探究DGAT1/2对鹅卵泡颗粒细胞孕酮合成和脂质代谢的影响,本研究首先克隆获得鹅DGAT1/2基因编码区序列,随后以8-10 mm（选择前卵泡）和F5（选择后卵泡）阶段颗粒细胞为研究对象,干扰DGAT1/2和过表达DGAT2,检测孕酮合成和脂质代谢相关指标,解析了两者在鹅卵泡颗粒细胞孕酮合成和脂质代谢的作用差异。主要结果如下:（1）获得鹅DGAT1基因序列长度为1893 bp;获得鹅DGAT2基因完整CDS区1077 bp。（2）通过实时荧光定量分析了DGAT1/2在不同等级鹅卵泡颗粒层中的表达情况,结果表明:DGAT1的表达量随着鹅卵泡直径的增加而增加,DGAT2则随着卵泡直径的增加其mRNA表达量逐渐减少。此外,体外培养等级前、F4-F2和F1阶段颗粒细胞,定量结果表明:DGAT1/2在体外培养的颗粒细胞中的表达模式与组织中的趋势一致。（3）在8-10 mm卵泡颗粒细胞中干扰DGAT1后,孕酮合成显著升高（P＜0.05）;而在8-10 mm过表达DGAT2后孕酮含量显著升高（P＜0.01）,FSHR的表达量显著升高（P＜0.05）。（4）干扰DGAT1后,在8-10 mm和F5卵泡颗粒细胞中胞内脂质沉积没有显著变化,在8-10 mm颗粒细胞中脂肪酸氧化关键基因CPT1、PPARα表达量降低,脂质代谢调控因子SREBP1、SREBP2、PPARβ表达量上调（P＜0.05）,在F5中ACC、FAS、APOB和PPARγ表达量上调;过表达DGAT2后都能显著增加胞内脂质沉积,在8-10 mm和F5颗粒细胞中ACC、FAS、DGAT1、SREBP1、SREBP2、PPARα、PPARβ、PPARγ表达量显著上调,APOB在8-10 mm颗粒细胞中下调。干扰DGAT2后,胞内脂质沉积没有显著变化。综上,DGAT1抑制鹅选择前卵泡颗粒细胞的孕酮合成,同时可以调控脂质代谢相关基因的表达,但对胞内脂质沉积没有显著影响;而DGAT2则促进鹅选择前卵泡颗粒细胞的孕酮合成,促进颗粒细胞胞内脂质沉积。DGAT1/2对颗粒细胞类固醇激素合成和脂质代谢关键基因的调控与鹅卵泡发育阶段,颗粒细胞分化程度有关。以上试验结果为阐明DGAT1/2在卵泡发育中的分子机制奠定了基础。
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