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作为模式生物,秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)是研究精子发生、精子活化和精卵受精的经典材料。与C.elegans相比,猪蛔虫(Ascaris suum)有易于解剖和易于获得大量精子的优点,是研究精子活化和精子迁移的理想材料。本报告运用RNA-seq等组学方法对这两个物种的精子生物学进行了探讨。
一、C.elegans精子mRNA组的鉴定分析
虽然精子没有转录和翻译,但是精子细胞中存在着复杂的RNA群体。以往对C.elegans的微阵列分析得到约七百个精子基因,但这些基因的获得基于对生殖突变体的比较,而不是基于纯化的精子细胞。本人分离得到了高纯度的C.elegans精子细胞,并采用高通量测序技术获得了C.elegans精子mRNA组。首先,本人从该精子mRNA组中鉴定出许多新的类似mRNA的非编码RNA(mlncRNAs),一个mlncRNA和一个长非编码RNA被鉴定为雄性特异表达的基因。其次,一个小规模筛选得到53个雄性特异表达的基因,它们中的12个尚未被报道。第三,通过对数百个精子基因的RNAi干扰,本人发现了一些新的控制育性的基因。RNAi沉默OGDH-1或ASB-2造成生殖腺发育异常,而沉默F22B5.4、K09E4.1或NSPD-4导致部分卵母细胞受精失败和后代数降低。第四,对精子mRNA组和小RNA组的比较发现,精子基因的表达受24G-26G内源小RNA所调控,并依赖于RRF-3的活性。许多精子基因在rrf3突变体中的表达显著升高。最后,精子基因(特别是精子富集的基因),在X染色体上的比例较在常染色体上的比例显著降低。总之,该精子mRNA组是一个系统研究C.elegans精子发生的宝贵资源。
二、A.summ性腺体细胞和生殖细胞的转录组分析
A.summ是一种寄生线虫。和C.elegans相比,这种线虫更易获得精子,非常适合生物化学研究。本人对A.summ的性腺生殖细胞(TES)和体细胞(VAS)分别进行了454转录组测序。首先,本人对两个转录组分别进行了功能注释。其次,对TES和VAS转录组的比较表明,参与DNA复制、RNA转录和泛素化途径的基因,在TES组织中的表达显著高于在VAS组织中的表达。通过对TES转录组和C.elegans基因芯片数据的比较,本人鉴定出165个控制生殖腺发育的基因(83%是调控精子发生的)。这些基因的产物富含丝氨酸/苏氨酸激酶和磷酸酶(KPS)以及酪氨酸KPS。共有2,681个A.suum基因被鉴定有相应的RNAi表型,大部分RNAi表型为胚胎致死亡、生长缓慢和不育等。