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第一部分载单宁酸铁和紫杉醇纳米粒的制备及表征检测目的制备一种以PLGA为载体;以液态的全氟戊烷(perfluorop entane,PFP)作为内核;紫杉醇(Paclitaxel,PTX)搭载于PLGA壳中;单宁酸铁(Metal Ion/Tannic Acid,Fe~ⅢTA)搭载于外壳上的新型多功能可相变的纳米粒(Fe~ⅢTA/PLGA/PTX/PFP),并检测其基本理化性质。方法采用双乳化法,利用PLGA搭载PTX、Fe~ⅢTA和包裹PFP的PLGA,制备Fe~ⅢTA/PLGA/PTX/PFP纳米粒。并检测其粒径、电位、形态结构、吸光度。检测纳米粒中PTX的含量,并计算其包封率和载药率。结果成功制备出的Fe~ⅢTA/PLGA/PTX/PFP纳米粒,检测其粒径为155.8±55.68 nm,表面电位为-27.3±5.14mV。紫外吸收光谱检测发现Fe~ⅢTA/PLGA/PTX/PFP纳米粒的吸光度主要来源于Fe~ⅢTA。透射电镜下Fe~ⅢTA/PLGA/PTX/PFP是以PLGA为外壳,PFP在壳内,PTX分布于PLGA壳层中,Fe~ⅢTA搭载于外壳上。吸光度检测和电镜都可证明Fe~ⅢTA成功搭载在纳米粒上。HPLC测得Fe~ⅢTA/PLGA/PTX/PFP中PTX的包封率为(70.89±8.03)%,载药率为(9.61±0.63)%。结论成功制备出载单宁酸铁和紫杉醇纳米粒Fe~ⅢTA/PLGA/PT X/PFP相变型纳米粒,并检测了其基本性质。第二部分载单宁酸铁和紫杉醇纳米粒的相变特性及药物释放实验目的利用808nm激光仪对Fe~ⅢTA/PLGA/PTX/PFP纳米粒进行激发并促进其相变。利用热显像仪检测其温度改变,利用光镜、Mylab90超声诊断仪检测其体外相变特性,并用高效液相仪检测紫杉醇的释放量。方法将不同浓度的Fe~ⅢTA/PLGA/PTX/PFP纳米粒置于96孔板中,用808nm激光激发并用热显像仪检测其温度改变。并在光镜下观察其相变情况,同时在超声显像仪中观察采集图像并测量相应的超声信号强度变化,并对图像进行数据分析。用高效液相仪检测激光激发和无激光激发下Fe~ⅢTA/PLGA/PTX/PFP纳米粒的PTX的含量并分析。结果Fe~ⅢTA/PLGA/PTX/PFP纳米粒的光热来源是Fe~ⅢTA,纳米粒浓度和光热温度呈正相关(r=0.8428,P<0.05)。经4周期的激光激发,同时观察纳米粒改变情况,可知纳米粒的光热效应稳定。纳米粒在激发后,产热促进PFP相变,可观察到其形态的改变,并检测其超声信号强度的改变,发现在超声显像(B-mode)和对比增强超声显像(CEUS mode)下的超声信号均发生变化,其纳米粒浓度和信号强度均呈正相关,P值均小于0.01。激光激发后观察激光激发对Fe~ⅢTA/PLGA/PTX/PFP的PTX药物释放的影响,可以发现激光激发后的Fe~ⅢTA/PLGA/PTX/PFP纳米粒的药物含量明显较高,说明激光激发可以促进药物释放。结论Fe~ⅢTA/PLGA/PTX/PFP纳米粒可以经激光激发产热,产生的热效应可以促进纳米粒相变,相变后的纳米粒具有一定的显像效果,相变也促进纳米粒中PTX的释放。第三部分载单宁酸铁和紫杉醇纳米粒治疗视网膜母细胞瘤的实验研究目的评估Fe~ⅢTA/PLGA/PTX/PFP纳米粒的光热治疗联合化疗对视网膜母细胞瘤体内外杀伤效果。方法体外治疗实验:将Fe~ⅢTA/PLGA/PTX/PFP加入Y79细胞中并孵育一定时间,并在激光共聚焦显微镜下评估其对纳米粒的吞噬情况;将Fe~ⅢTA/PLGA/PFP纳米粒按浓度加入不同细胞组中,分析纳米粒对不同细胞的杀伤效果,以评估其生物安全性;设立以下分组:空白对照组、激光组、PTX组、PLGA/PTX/PFP+激光(PTP+激光)组、Fe~ⅢTA/PLGA/PTX/PFP(FPTP)组、Fe~ⅢTA/PLGA/PTX/PFP+激光(F PTP+激光)组,并用CCK-8法、活/死细胞法、细胞凋亡法,来检测纳米粒杀伤作用。体内治疗实验:构建一定数量的动物肿瘤模型。选择体重和肿瘤相近的48只瘤鼠,并分成:空白对照组、激光组、PTX组、PLGA/PTX/PFP+激光(PTP+激光)组、Fe~ⅢTA/PLGA/PTX/PFP(F PTP)组、Fe~ⅢTA/PLGA/PTX/PFP+激光(FPTP+激光)组,并综合评估各组处理对肿瘤的作用效果。检测各组体重和肿瘤的改变情况。治疗后的第三天随机从各组中选取3只裸鼠,将瘤块分离并对其进行H E、Tunnel、PCNA及热休克蛋白分析。18天后,染色分析瘤鼠的器官组织有无损害。结果体外细胞实验显示了肿瘤细胞对纳米粒有良好的吞噬果,Fe~ⅢTA/PLGA/PTX/PFP纳米粒经激光激发后的光热治疗联合化疗具有对视网膜母细胞瘤Y79细胞最好的杀伤效果。体内动物实验显示Fe~ⅢTA/PLGA/PTX/PFP纳米粒经激光激发后具有最佳的抑制肿瘤生长的治疗效果(P<0.05)。通过观察各组瘤鼠的各重要脏器组织,发现F eⅢTA/PLGA/PTX/PFP纳米粒经激光激发后的光热治疗联合化疗对小鼠的各重要脏器组织无明显损伤。结论Fe~ⅢTA/PLGA/PTX/PFP相变纳米粒可以有效地聚集在肿瘤中,并被肿瘤细胞所吞噬。利用808nm激光激发纳米粒,产生光热效应,同时引起相变发生并促进药物释放,将光热治疗和化学治疗相结合,可达到最佳的控制肿瘤生长的目的,通过体外细胞实验和观察纳米粒治疗对小鼠的各重要脏器组织的影响,可说明其安全性好。