【摘 要】
:
三氯乙烯(trichloroethylene,TCE)是一种广泛应用于工业生产中的有机溶剂,同时也是一种常见的环境污染物,TCE职业暴露和环境暴露引起的健康问题成为了人们普遍关注的公共卫生
论文部分内容阅读
三氯乙烯(trichloroethylene,TCE)是一种广泛应用于工业生产中的有机溶剂,同时也是一种常见的环境污染物,TCE职业暴露和环境暴露引起的健康问题成为了人们普遍关注的公共卫生问题。TCE中毒常伴随着不同程度的肝损伤,然而,TCE致肝脏损伤具体的分子机制尚未清楚。课题组前期研究发现TCE可诱导肝细胞SET表达上调,并证实了 SET是TCE致肝细胞毒性的关键蛋白。大量研究表明,SET与表观遗传调控有着密切的联系,但是SET如何在TCE致肝细胞毒性中起作用,特别是涉及TCE与SET之间的表观遗传调控机制仍有待进一步研究。在课题组前期研究中筛选出TCE作用下肝细胞中表达下调、可能靶向调控SET的miRNA候选分子miR-21a,miR-199b-5p。此外还发现,TCE处理可诱导L-02肝细胞发生DNA损伤,DNA损伤修复蛋白p53表达上调,进一步研究表明,SET蛋白可在一定程度上抑制p53的表达。利用蛋白质组学研究发现SET可介导组蛋白H3K79二甲基化(H3K79me2)修饰水平降低。在此基础上,本研究深入探索了 SET上下游的表观遗传调控机制及其在TCE致肝细胞毒性中的作用。本研究主要分成以下两个方面内容:研究内容1:miRNA调控SET在TCE致肝细胞毒性中的作用方法:在前期筛选肝细胞中可能靶向作用于SET的miRNA(miR-21a,miR-199b-5p)的基础上,双荧光素酶报告系统检测miR-21a,miR-199b-5p与SET之间的靶向调控关系;进一步利用Western blot检测miRNA高表达与稳定干扰L-02肝细胞中SET的变化。流式细胞术分析TCE处理后正常L-02肝细胞、miRNA稳定高表达及稳定干扰的肝细胞凋亡的变化。结果:双荧光素酶报告基因和Western blot检测结果表明miR-199b-5p可以与SET-3’ UTR结合,从而部分抑制SET表达。细胞流式检测结果表明,TCE处理后,与正常L-02肝细胞比较,miR-199b-5p低表达时凋亡率明显升高,提示miR-199b-5p可以在一定程度上缓解TCE诱导的肝细胞凋亡。结论:L-02细胞中miR-199b-5p可以与SET-3’ UTR结合,从而部分抑制SET表达,在一定程度上缓解TCE诱导的肝细胞凋亡。研究内容2:SET通过介导H3K79me2调控p53在TCE致肝细胞DNA损伤中的作用方法:以L-02细胞与SET缺陷L-02细胞为受试细胞,Ommol/L、8mmol/L TCE处理24h后,通过染色质免疫共沉淀结合荧光定量PCR技术(CHIP-qPCR)检测DNA损伤修复基因p53启动子区域H3K79me2修饰水平。通过siRNA靶向抑制肝细胞中H3K79特异性甲基转移酶Dot1L,进一步分析H3K79me2对p53的表观遗传调控作用以及p53在TCE致肝细胞DNA损伤修复中发挥的关键作用。结果:前期研究显示,TCE致肝细胞毒性作用中,SET能部分抑制p53表达。本研究发现,TCE作用下,L-02肝细胞与SET缺陷L-02肝细胞中p53启动子区域组蛋白H3K79me2修饰水平上调。通过抑制肝细胞中H3K79甲基化转移酶Dot1L后发现,H3K79me2修饰水平下调时,p53表达也降低。彗星实验结果表明,当p53表达被抑制时,TCE诱导的L-02肝细胞DNA损伤加重。结论:SET通过介导p53启动子区域H3K79me2降低,部分抑制DNA损伤修复蛋白p53的表达,而p53表达下调在一定程度上会加剧TCE致肝细胞DNA损伤。
其他文献
目的:探讨肺隐球菌病(pulmonary cryptococcosis,PC)与肺曲霉菌病(pulmonary aspergillosis,PA)的临床特征的差异,为这两种疾病的临床鉴别提供依据,减少误诊漏诊。方法:回顾
列当(Orobanche spp.)是一种根部全寄生杂草,在全世界范围内广泛分布,严重危害农业生产,使农作物产量下降,是我国检疫性恶性杂草之一。目前世界各国均没有有效的方法防除列当
目的观察“调神柔筋”针刺法与醒脑开窍针刺法治疗缺血性卒中后下肢痉挛性瘫痪的临床疗效差异,以及评价两种针刺法在患者运动功能、自我感受方面的改善情况,为临床针刺治疗缺血性卒中后下肢痉挛性瘫痪提供一定参考。方法本研究采用单中心、随机、对照研究方法,所纳入病例均来自天津中医药大学第一附属医院针灸科门诊及病房,将符合纳入标准的60例患者根据入组顺序按照随机数字表,随机分为试验组和对照组,每组30例,两组均按
水稻纹枯病是在世界范围内造成严重经济损失的水稻病害之一,导致水稻产量和品质严重下降。东北三省作为我国主要的水稻生产区之一,水稻纹枯病发生广泛。在实际生产中的水稻主栽品种多为感病品种,防治手段高度依赖化学防治,在缺乏抗性种质资源的条件下,如何绿色防控水稻纹枯病,是目前水稻生产面临的突出问题。现有的研究表明,除立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)外,一些丝核菌属其它真菌也是水稻纹枯病的致
7xxx系超高强铝合金具有高的强韧匹配性、良好的加工性、较好的耐蚀性和疲劳性能等优点,被广泛应用于航空航天、军事及交通领域。AlZn6Mg2Cu2铝合金是7xxx系铝合金中强度较高、综合性能和淬透性较好的一类合金,常以厚板或其他大尺寸断面的产品在航空航天、交通运输、武器装备等领域作为轻质高强结构材料广泛使用。本文选以AlZn6Mg2Cu2铝合金为研究对象,利用光学金相显微镜、扫描电镜、维氏硬度计以
为了提高普通塑料导爆管的强度、韧性及耐热性等物理性能,用改性剂高密度聚乙烯(HDPE)、沙林(Surlyn)、硫酸钙晶须(CSW)及增容剂马来酸酐接枝聚乙烯(PE-g-MAH)分别或共同作用于低密度聚乙烯(LDPE)进行熔融共混改性,通过力学性能、微观结构、TG-DSC等试验得到了高性能改性LDPE复合材料,并制备了以不同改性LDPE复合材料为管壁材料的改性导爆管,与普通塑料导爆管进行了火工品性能
目的:探讨急性缺血性卒中合并non-HDL-C异常的影响因素及其中医证型的分布规律,为中医药防治该类疾病提供一定的辨证依据。方法:采用流行病学调查中横断面研究的方法,收集201
目的:观察四二调胃汤治疗肝胃不和型功能性消化不良(Functional Dyspepsia,FD)的临床疗效。方法:选取2015年1月至2016年5月就诊于山西省中西医结合医院门诊患者中经消化内镜
研究背景:咳嗽变异性哮喘(cough variant asthma,CVA)是以慢性咳嗽为特征的哮喘亚型,可以被说话、灰尘及刺激性气味等因素诱发甚至加重,无喘息气短等呼吸道症状,但具有气道高反应性。现代医学主要通过吸入糖皮质激素、支气管扩张剂以及抗炎等治疗。但是部分病人治疗效果不佳,未能改善气道敏感性,长期咳嗽对CVA患者的工作与生活产生诸多影响,并加重患者的心理负担。导师苗青教授从事中医临床、教
热弹性阻尼(Thermoelastic damping,简称TED)作为—种内部能量耗散机制,当谐振器处于微/纳尺度时会成为微/纳电机系统(Micro/nano-electro-mechanical system,简称MEMS/NEMS)的主要耗能方式,并且不能通过改善外部条件来降低。功能梯度材料(Functionally graded material,简称FGM)是一种材料组分的体积分数可在指