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胃癌在我国是引起死亡人数最多的恶性肿瘤，极大危害着人们的健康。化疗是当前治疗胃癌的主要手段之一，然而尽管新的抗癌药物及化疗方案不断推出，但治疗效果仍无重大进展，其主要原因就是胃癌细胞对化疗药物产生了多药耐药，因此研究和探索肿瘤多药耐药的产生机理及逆转方法具有非常积极的意义。Ss-A/Ro核蛋白60KD亚单位(Ro 60)是我研究所王新博士采用改良DD-PCR技术，在耐长春新碱胃癌细胞SGC7901/VCR与药敏胃癌细胞SGC7901 的差示比较中发现的在SGC7901/VCR中高表达的基因，并通过反向Northern杂交证实。阐明Ro60编码基因在胃癌多药耐药中的功能和作用机制，将有助于我们对胃癌多药耐药的发生及调节机制的理解和认识。 目的：对Ro 60在胃癌多药耐药中的功能进行研究，并探讨其作用机制。 方法：①应用RT-PCR技术从SGC7901/VCR细胞中克隆Ro 60编码基因的cDNA。②应用半定量RT-PCR技术检测Ro 60在胃癌细胞中的表达情况。③利用DNA重组技术构建Ro 60编码cDNA的正、反义表达载体，在脂质体的介导下分别将其转导入SGC7901细胞及SGC7901/VCR细胞，应用半定量RT-PCR技术检测Ro 60在正、反义转染细胞及其对照细 第四军医大学博士学位论文一胞中的表达情况。④通过MTT法绘制细胞生长曲线及进行体外药物敏感性分析，计算胃癌细胞对化疗药物的r。值。⑤借助流式细胞促检测胃癌细胞内蓄积和精留的阿霉素。③应用药物阻断实验和 Western blot，对RO 60在胃癌多药耐药中的作用机制进行研究。 结果：①应用RTPCR技术从SGC7901／VCR细胞中克隆了R。60编码 cDNA，并发现了 R。60编码基因的两种转录变异体，分别命名为Ss一人服o 60 KDKD subunit variant（Ro 60 VI）、Ss－A仅o 60 KDKD subunit v叫ant 2 （Ro 60 VZ），在 GenBank 进行了登录，Accession numbers 分别为AY205314、AY205315。②半定量RTPCR 结果显示，RO 60 在SGC7901／VCR中的表达强度高于 SGC7901细胞及 Hela细胞，Ro 60的两种转录变异体在SGC790lVCR中的表达强度也高于SGC7901细胞及Hela细胞。＠成功构建了 R。60 CDNA及两种变异体的正、反义表达载体，应用脂质体转染法分别将其转导入SGC7901、SGC7901／VCR，半定量RTPCR结果证实，R。60。DNA及两种变异体的正义表达载体转染 SGC790细胞后提高了 R。60及两种变异体在 SGC790细胞中的表达；R。60反义表达载体转染SGC790lfVCR细胞后降低了 RO 60在SGC7901／VCR细胞中的表达。④体外药物敏感性分析结果显示，与SGC7901 细胞和转染有空载体的SGC7901细胞相比，转染R。60。DNA及两种变异体正义表达载体的SGC7901细胞对长春新碱、5一氟尿晓晚丝裂霉素、顺铂、阿霉素的敏感性显著降低：与S6＊7901 ／V／V＊R细胞和转染有空载体的S＊C7901 ／V／V＊R细胞相比，转染R。60反义表达载体的SGC7901／VCR细胞对长春新碱、丝裂霉素、顺铂、阿霉素的敏感性显著升高。⑤流式细胞仪检测结果表明，与对照细胞相比，转染正义表达载体的SGC7901细胞内蓄积和储留的阿霉素有所减少，转染反义表达载体的SGC7901／VCR细胞内蓄积和编留的阿霉素有所增加。③药物阻断实验表明，SGC7901细胞转染 RO 60正 3 第四军医大学博土学位论文义表达载体后出现的耐药表型能被P－gp的抑制剂维拉帕米部分逆转。①Western blot 结果显示，与 SGC790lfVCR 细胞和转染有空载体的SGC7901／VCR细胞相比，转染 RO 60反义表达载体的 SGC7901／VCR细胞中的P－gp、bC12表达量明显减低。 结论：①在SGC790lfVCR细胞中发现R。60编码基因的两种转录变异体，并登录到 GenBank，Accession number分别为 AY205314。AY205315，RO 60 CDNA及两种转录变异体在SGC7901／VCR细胞中的表达强度均高于 SGC7901细胞及 Hela细胞。②转染有 Ro 60 cDNA及其变异体正义表达载体的 SGC790细胞表现出一些 MDR的特性，转染有 R。60反义表达载体的 SGC7901／VCR细胞的耐药性明显减低。③RO 60是通过影响胃癌细胞中的药物蓄积而介导肿瘤细胞多药耐药的，RO 60在胃癌多药耐药中的功能与P－gP、bC12有关。