论文部分内容阅读
目的：探讨丝素蛋白多孔支架（Porous Silk Fibroin Scaffolds，PSFSs）联合硫酸软骨素酶ABC（chondroitinaseABC，ChABC）移植对脊髓损伤大鼠神经再生和功能恢复的作用。方法：采用冷冻干燥法制备PSFSs，扫描电镜观察结构。将96只SD大鼠随机分为对照组（A组）、PSFSs移植组（B组）、ChABC移植组（C组）和PSFSs+ChABC移植组（D组），每组24只。4组均采用标准的脊髓全横断模型制备方法，切除2mm脊髓组织。A组作为对照，B、C、D组分别移植PSFSs、ChABC和PSFSs+ChABC。术后1、2、4周，采用BBB评分法检测大鼠后肢运动功能恢复情况；取出相应脊髓组织行HE染色和神经丝蛋白-200（neurofilament-200，NF-200）、胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）、生长相关蛋白-43（growth associated protein43，GAP-43）免疫组织化学染色，以及GAP-43免疫荧光染色，软件分析各组NF-200、GAP-43阳性染色的积分吸光度（IA）值和GFAP阳性染色面积，并在术后4周对NF-200、GFAP、GAP-43行免疫印迹分析（western blot analysis），定量和定性评价神经纤维束修复、再生及胶质瘢痕形成情况。结果：扫描电镜观察见PSFSs内部呈多孔的海绵状结构，内部孔隙较多，分布均匀。术后各组各时间点BBB评分结果示，术后2周A组BBB评分低于B、C、D组（P <0.05），术后4周D组BBB评分优于B、C组（P <0.05），B、C组BBB评分优于A组（P <0.05）。HE染色示，术后4周时各组均有空洞形成和神经元坏死，其程度在B、C、D组低于A组。术后4周B、C、D组NF-200和GAP-43阳性染色的IA值高于A组（P <0.05），D组高于B、C组（P <0.05）。术后2、4周D组GFAP染色阳性面积小于A、B、C组（P <0.05），B、C组面积小于A组（P<0.05）。术后4周GAP-43免疫荧光染色示B、C、D组的GAP-43荧光强度高于A组，且以D组为著；D组损伤区内GAP-43阳性的神经纤维多于其他3组。免疫印迹分析表明对照组NF-200、GFAP、GAP-43表达量与各移植组之间比较差异具有统计学意义（P <0.05）。对照组GFAP表达明显强于各治疗组，而各治疗组GAP-43、NF-200表达明显强于对照组，差异有统计学意义(P <0.05)。结论：PSFSs与硫酸软骨素酶ChABC联合移植能够促进全横断脊髓损伤大鼠轴突再生和后肢运动功能恢复。