由于复杂的肿瘤微环境,传统的仅针对肿瘤细胞的治疗方案很难彻底治愈癌症或从根本上阻止肿瘤病理进展。合理应用CSF-1R抑制剂与化疗药物联合治疗肿瘤,在重塑肿瘤炎性微环境同时增强化疗敏感性,可以达到双向联合调控肿瘤细胞活性,抑制肿瘤生长和转移的治疗效果。本课题通过构建legumain酶可激活的具有乳腺肿瘤细胞和肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）双靶向性的多功能自组装纳米载体系统,共同递送紫杉醇前药（PTX-ss-VE）和CSF-1R抑制剂（PLX3397）应用于乳腺肿瘤的联合治疗,以达到肿瘤和炎性微环境治疗的协同作用,有望解决乳腺肿瘤复发和转移的治疗问题。研究内容分为以下五个部分:第一部分,紫杉醇前药的合成与表征。设计对谷胱甘肽敏感的PTX-ss-VE（Ps）前药以及对谷胱甘肽不敏感的PTX-cc-VE（Pc）前药。通过~1H-NMR和MALDI-TOF质谱验证了Ps前药和Pc前药的成功合成。第二部分,载PLX3397的紫杉醇前药纳米粒的制备与表征。通过超声-乳化法和透析法制备载药纳米粒Ps@HA NPs、PLX/Ps@HNPs、PLX/Ps@HATpepNPs和PLX/Pc@HA NPs,并对载药纳米粒的粒径、分散系数、Zeta电位载药量和包封率、药物PLX3397与纳米载体的相互作用以及体外药物释放特性等进行考察。结果表明四种纳米制剂的平均粒径均在91 nm至157 nm之间,PDI小于0.13,且Zeta电位都在-13 m V至-24m V的范围内,包封率均在82%以上,载药量均在3.1%以上。透射电子显微镜下Ps@HATpep NPs以及PLX/Ps@HATpepNPs均具有均匀且规则的圆球形态,且分散性良好。同时通过XRD衍射分析Ps前药和PLX3397均具有良好的分散性并以无定形或固体分散形式存在于PLX/Ps@HATpepNPs内部。体外稳定性实验显示纳米粒在4℃条件下具备良好的储存稳定性和血清稳定性。另外,体外释放实验结果与还原敏感纳米粒降解实验中显示,Ps@HA NPs以及PLX/Ps@HATpepNPs在中性环境均具有良好的缓释特性,在10m M DTT条件下可加速PTX的释放,呈现出GSH还原敏感的PLX和PTX顺序释药特性。第三部分,纳米粒的体外细胞评价。在体外细胞水平,通过细胞摄取实验对不同纳米制剂的靶向肿瘤细胞和TAMs的能力进行了评价。研究表明相比于其他制剂,PLX/Ps@HATpepNPs显示出最大的摄取量。通过细胞划痕实验证实了纳米粒能特异性抑制肿瘤细胞的迁移。对单培养4T1细胞模型和4T1/M2-TAMs共培养细胞的增殖抑制实验结果也呈现出PLX/Ps@HATpepNPs具有最强的细胞毒性作用。体外肿瘤球实验结果表明PLX/Ps@HATpepNPs纳米粒表现出最显著的肿瘤生长抑制作用。第四部分,体内肿瘤靶向性评价。建立皮下移植小鼠4T1乳腺癌模型,选用Di D包载在纳米粒中,制备Di D/Ps@HA NPs和Di D/Ps@HATpep NPs纳米制剂。使用IVIS Spectrum小动物活体成像系统对小白鼠进行拍摄,观察并分析小白鼠中的荧光分布情况,结果表明,相比于其他对照组,Di D/Ps@HATpepNPs在肿瘤组织的靶向递送效率显著提高。第五部分,体内抗肿瘤药效学和安全性评价。进行体内抗肿瘤药效学和安全性评价,分析治疗终点时的肿瘤体积、重量、肿瘤大小等评价体内抗肿瘤效果,结果表明,抗肿瘤效果:PLX/Ps@HATpepNPs＞PLX/Ps@HA NPs＞PLX/Pc@HA NPs＞Free Ps+PLX＞Free Ps＞PBS;通过考察肺转移情况,免疫荧光法及RT-PCR手段结果显示PLX/Ps@HATpep NPs有较强的肿瘤转移抑制效果、最大的肿瘤细胞凋亡率和消耗M2巨噬细胞的能力。通过检测动物体重以及在治疗终点检测小鼠各项血生化指标和H＆E染色等进行小鼠体内安全性评价实验,进一步证明PLX/Ps@HATpep NPs具备良好的生物安全性。