将NDV F₄₈E₉株接种鸡胚进行病毒增殖，并对发病鸡胚作病理学观察，可见病胚发育迟滞、胚体弱小、体表潮红、多处有出血点，胃、肠、肝、脑、肾、心、骨骼肌等重要器官出现不同程度的充血、淤血、水肿、出血和实质细胞的变质性变化，所收集的病胚的尿囊液纯化后经电镜观察可见NDV粒子。 根据NDV P蛋白和M蛋白已知基因核苷酸序列设计并合成了两对引物PU1/PL1和PU2/PL2。提取F₄₈E₉株RNA，以RT-PCR法扩增出大小约1.1kb和1.6kb的目的基因片段，两者之间约有100bp左右的基因重复，将这两个片段分别克隆到pMD18-T载体上，对阳性重组子经酶切分析、PCR鉴定及序列测定证明是正确的。根据测序结果，再利用限制性内切酶EcoRⅠ、HindⅢ、MseⅠ对两个重组质粒分别进行了酶切处理并回收目的片段进行连接，所得的阳性重组质粒经酶切鉴定后再进行序列测定，结果证实我们得到了NDV F₄₈E₉株P基因完整序列的克隆。通过序列分析发现F₄₈E₉株P蛋白基因核苷酸序列与La Sota株的P蛋白基因核苷酸同一性为87％，氨基酸同源性为91％，表明F₄₈E₉株与La Sota株有一定亲缘关系。同时对其编码氨基酸的抗原性值分析，表明在20-28、113-122、190-200、220-230位氨基酸等四个区域存在抗原表位。 根据NDV F₄₈E₉株P基因核苷酸序列和杆状病毒转移载体pF_ASTB_AC1多角体蛋白基因阅读框架，将重组质粒pMD18-T-P经HindⅢ作部分酶切，再经EcoRⅠ酶切，然后与用EcoRⅠ/HindⅢ双酶切的杆状病毒转移载体pF_ASTB_AC1相连接，使P蛋白基因克隆到pF_ASTB_AC1的多角体启动子下游。经酶切分析、PCR鉴定及序列测定，证实获得了含P蛋白基因的转移载体pF_ASTB_AC1-P。然后将该转移载体转化到DH_10BAC感受态细胞中，经蓝白斑筛选、挑菌、质粒提取，通过杆状病毒多角体蛋白基因通用引物及P基因特异引物进行PCR鉴定，证实得到了重组杆状病毒DNA。将此重组组杆状病毒DNA转染sf9昆虫细胞，于感染后72小时收获重组病毒粒子。再将重组病毒感染对数生长期的sf9昆虫细胞，于感染后24、48、72、96小时收获感染细胞，经SDS-PAGE电泳分析，证明NDV F₄₈E₉株P蛋白基因在重组杆状病毒系统中获得了表达，其分子量大小约为56kD。