瑞替普酶(Reteplase)是第三代溶血栓药物，该产品在临床上更具有药物半衰期长、溶栓作用强、副作用小等优点。Reteplase是组织型纤溶酶原激活剂的衍生体，在原分子结构的基础上进行了功能域的删除，保留了kringle Ⅱ，蛋白酶两个功能域及N端的3个氨基酸。该重组突变体是单链非糖基化蛋白，由355个氨基酸组成，分子量约为39kD，含有9对二硫键。 选用E.coli作为表达系统，目的蛋白能够在很短时间内实现高水平表达，但表达产物在胞内以无活性的聚集物—包涵体的形式存在。首先高密度发酵重组E.coli工程菌生产包涵体，其中IPTG的诱导是关键的一步。诱导条件的优化既可以诱导蛋白最大限度的表达，又避免了过高的IPTG的浓度对工程菌的毒害作用。在IPTG的诱导下表达重组蛋白时，这些重组蛋白质会在细胞内凝集，形成无活性的包涵体颗粒。超声裂解离心后得到的包涵体除含有目的蛋白外，还有一些核酸，杂蛋白和膜蛋白，包涵体的纯度直接影响到后续变性与复性的效果，因此要获得纯化的有活性的Reteplase，首先要提取和纯化包涵体。低浓度的变性剂例如尿素可以除去包涵体上的一些膜蛋白等杂质，但是纯化程度还是有一定的限制，应用盐洗—尿素洗—水洗三次连续的洗涤纯化方法能在相当程度上提高包涵体的纯度，变性效果也有所提高。 变性的目的是将致密的包涵体打开，使没有生物学活性的Reteplase转为具有活性的蛋白质，以提高重组蛋白的复性率，降低生产成本。由于Reteplase分子中的18个cys要形成9对二硫键，所以利用E.coli表达Reteplase时，往往会发生二硫键的错配，这也是包涵体形成的原因之一。所以溶解