【摘 要】
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辣椒炭疽病是侵染辣椒的重要病害之一,严重影响辣椒的产量和品质。化学防治是目前防治该病害的重要手段,但化学农药过度使用带来生态安全问题并对人类健康造成影响。化学农药与生物农药两者协同防治对减少化学农药用量和提高生物农药稳定性具有重要意义。基于此,本研究从健康辣椒植株中分离并筛选出对辣椒炭疽病菌具有良好抑菌作用的拮抗细菌,命名为内生细菌LY7,对其进行分类学鉴定,测定其生物学特性、抑菌活性、促生作用,
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辣椒炭疽病是侵染辣椒的重要病害之一,严重影响辣椒的产量和品质。化学防治是目前防治该病害的重要手段,但化学农药过度使用带来生态安全问题并对人类健康造成影响。化学农药与生物农药两者协同防治对减少化学农药用量和提高生物农药稳定性具有重要意义。基于此,本研究从健康辣椒植株中分离并筛选出对辣椒炭疽病菌具有良好抑菌作用的拮抗细菌,命名为内生细菌LY7,对其进行分类学鉴定,测定其生物学特性、抑菌活性、促生作用,并将其制剂化,筛选优化其悬浮剂配方,研究菌株LY7悬浮剂与杀菌剂协同防治辣椒炭疽病。具体研究内容如下:1.通过平板对峙试验,以山西省辣椒炭疽病主要致病菌Colletotrichum scovillei为靶标从60余株生防细菌中初筛出10株的拮抗细菌,通过牛津杯法定量复筛得出2株对C.scovillei具有良好抑菌作用的拮抗细菌LJ6和LY7,抑菌率分别为82.57%、83.52%。通过生长速率法,对8种杀菌剂进行室内毒力测定,筛选出毒力较强的3种化学杀菌剂戊唑醇、咪鲜胺和吡唑醚菌酯,EC50值分别为0.336μg/m L、0.135μg/m L和0.031μg/m L。将3种杀菌剂与拮抗细菌LJ6和LY7分别进行生物相容性测定,最后筛选出相容性较好的菌药组合,即咪鲜胺与菌株LY7组合。2.利用形态学鉴定、16S r DNA与gyr A特异基因对菌株LY7进行系统发育研究,将菌株LY7鉴定为贝莱斯芽胞杆菌Bacillus velezensis。对菌株LY7的生长曲线进行测定,发现菌株LY7在0~4 h生长较为缓慢,4~24 h进入对数期,24~52 h曲线趋于平稳为稳定期;52 h后时曲线下降趋势,菌量有所减少;测定了菌株LY7的生长温度,在20~45℃的条件下,菌株LY7均能正常生长,45℃以上随温度的升高,菌株LY7存活率降低;在80℃下,其活菌率仅为6.54%,不利于其存活。3.对菌株LY7进行室内毒力测定,测得其EC50值为3.1×10~3 CFU/m L。通过含药平板法测得稀释10倍的发酵液上清液对C.scovillei的抑制率可达53.86%;平板对扣法测得1×10~8 CFU/m L浓度菌量所产生的挥发性物质抑制率达到48.01%。菌株LY7抑菌谱测定中,对8种病原真菌均具一定的抑制作用,其中C.gloeosporioides抑制率最高,为69.73%,对B.cinerea的抑制率最低,为43.44%。将菌株LY7与咪鲜胺以各自EC50浓度进行不同体积配比,得出菌药最佳配比为3:7,具增效作用,其增效比率值为1.50。4.为明确菌株LY7对辣椒的促生作用,在辣椒种子萌发试验中,除发酵原液的发芽指数低于对照组,对辣椒种子的萌发具有抑制作用以外,不同浓度发酵液稀释液均具有促生作用,稀释100倍的发酵液对种子萌发促进作用最大,发芽指数达27.16;辣椒幼苗生长试验中,发酵原液对辣椒幼苗的生长具有抑制作用,发酵稀释液对辣椒幼苗有促进作用。对菌株LY7进行促生机理初探,发现其无溶磷解钾能力,具有较强的嗜铁能力,可产生IAA,且L-色氨酸可进一步促进菌株LY7产生IAA。5.菌株LY7制剂化试验,采用冷冻干燥法制备母药后,通过生物相容性、正交试验对水悬浮剂助剂进行优化筛选,得到最优配方:LY7菌粉10%,防腐剂对羟基苯甲酸甲酯0.06%,润湿分散剂亚甲基双萘磺酸钠2%、木质素磺酸钙1.5%和吐温-80 1.5%,增稠剂羧甲基纤维素钠0.3%,防冻剂丙三醇4%,紫外保护剂山梨糖醇0.3%,蒸馏水补足至100%。6.田间药效试验结果表明,咪鲜胺单独处理组对辣椒炭疽病的防效为63.97%;稀释100倍、200倍、400倍菌株LY7悬浮剂(LY7-SC)各单独处理组的防效分别54.26%、51.16%、50.39%,各LY7-SC处理组防效低于咪鲜胺处理组;咪鲜胺与稀释100倍、200倍、400倍LY7-SC的7:3混配处理组防效分别为72.09%、58.14%、56.59%,咪鲜胺与稀释100倍LY7-SC处理组防效显著高于咪鲜胺处理组;在菌药交替使用组中,先菌后药组和先药后菌组防效分别为65.89%、48.84%,先菌后药组防效优于先药后菌组,先菌后药组防效与咪鲜胺处理组无显著差异。
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