论文部分内容阅读
目的:动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是最常见的循环系统疾病之一,也是最常见的危害人类健康的疾病之一,主要特征为血管壁内皮细胞受到损伤导致脂质堆积、趋化炎症细胞聚集。其中氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)是重要的危险因子之一,在内皮细胞功能障碍或受到损伤时ox-LDL可与其表面上的特异性受体血凝素样氧化低密度脂蛋白受体(lectin-like oxidized low-density lipoprotein receptor-1,LOX-1)相结合,诱导泡沫细胞的形成,从而启动动脉粥样硬化斑块的形成与发展。在这个过程中,血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)、细胞间黏附分子-1(intercellularcell adhesion molecule-1,ICAM-1)是很重要的两种黏附分子,它们参与多种病理、生理过程,会引起内皮细胞抗凝和抗黏附功能失调,从而加速AS形成。Ang-(1-7)是新的肾素-血管紧张素系统成员之一,具有扩管、抗增殖,对心血管系统有着多方面的保护和调节作用。本研究拟在体外培养大鼠主动脉内皮细胞(SVAREC),通过不同浓度ox-LDL诱导和在ox-LDL基础上加入Ang-(1-7)诱导,观察内皮细胞前后增殖情况及LOX-1、VCAM-1、ICAM-1转录水平的动态改变及Ang-(1-7)保护内皮细胞的可能机制。为更深入理解AS形成的分子机制以及寻找抗AS药物潜在的分子靶点。方法:1.实验用Cell Counting Kit(CCK-8)检测经ox-LDL组和ox-LDL+Ang-(1-7)组处理后SVAREC细胞的增殖情况。2.实验用荧光实时定量聚合酶反应(RT-PCR)法检测经过ox-LDL组和ox-LDL+Ang-(1-7)组处理后的SVAREC细胞LOX-1、VCAM-1、ICAM-1m RNA的表达水平。结果:1.用Cell Counting Kit(CCK-8)检测结果显示:①ox-LDL组:加入不同浓度的ox-LDL(加入浓度为10mg/L、20mg/L、50mg/L、100mg/L)和SVAREC细胞分组培养24h,发现其明显抑制SVAREC细胞的生长增殖。在0-100mg/L的浓度范围内,随ox-LDL药物浓度增加,ox-LDL实验组的细胞增殖抑制率逐渐升高,并呈现剂量依赖性关系,与同时间对照组相比较,它们之间的差异有统计学意义(P<0.05)。②ox-LDL+Ang-(1-7)组:实验组在加入终浓度为100mg/L的ox-LDL试剂的基础上,再分别加入Ang-(1-7)浓度为10-9mol/L、10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L和SVAREC细胞分组培养24h后,随着Ang-(1-7)浓度的升高,该组SVAREC细胞的生长抑制率逐渐降低,并呈现剂量依赖性,与同时间对照组相比较,它们之间的差异有统计学意义(P<0.05)。2.实验用RT-PCR法检测结果显示:①ox-LDL组:加入不同浓度的ox-LDL(加入浓度为10mg/L、20mg/L、50mg/L、100mg/L)和SVAREC细胞分组培养24h后。在0-100mg/L的浓度范围内,随着ox-LDL的浓度升高,LOX-1、VCAM-1、ICAM-1m RNA的表达水平升高,与同时间对照组相比较,它们之间的差异有统计学意义(P<0.05)。②ox-LDL+Ang-(1-7)组:实验组在加入终浓度为100mg/L的ox-LDL试剂的基础上,再分别加入Ang-(1-7)浓度为10-9mol/L、10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L和SVAREC细胞分组培养24h后,随着Ang-(1-7)浓度的升高,随着Ang-(1-7)的浓度升高,LOX-1、VCAM-1、ICAM-1m RNA的表达水平明显降低,与同时间对照组相比较,它们之间的差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1.ox-LDL能有效抑制SVAREC细胞生长,而Ang-(1-7)能逆转ox-LDL所致的细胞生长抑制。2.ox-LDL能使LOX-1、VCAM-1、ICAM-1m RNA的表达水平升高呈剂量依赖性,Ang-(1-7)使LOX-1、VCAM-1、ICAM-1m RNA的表达水平降低并呈剂量依赖性,提示在内皮细胞功能障碍或损伤时,ox-LDL可与其内皮细胞表面的特异性受体LOX-1相结合,促进黏附分子ICAM-1、VCAM-1的表达,从而促进AS的形成,而Ang-(1-7)能有效逆转ox-LDL所致内皮损伤,Ang-(1-7)可能对内皮细胞具有一定的保护作用。