目的:在耳蜗中,三磷酸腺苷（ATP）是对调节声转导、听敏度、外毛细胞主动的机械放大、耳蜗内电位、耳蜗内环境稳定、控制血管张力等具有关键作用的信号分子。目前的研究认为耳蜗中ATP的主要来源有三种,分别为血管纹的缘细胞、未成熟的耳蜗大上皮嵴的支持细胞和成熟耳蜗的支持细胞。近年来的研究显示,ATP以囊泡的形式储存于耳蜗血管纹缘细胞的溶酶体中,并且初步证实以钙离子依赖性的方式释放胞吐至细胞外。有关缘细胞内钙离子如何参与ATP释放的具体机制我们仍知之甚少。本研究拟在观察P2Y嘌呤受体在新生大鼠耳蜗血管纹缘细胞的表达,通过促进或者抑制原代培养的缘细胞内质网钙库释放,研究缘细胞胞内钙离子浓度变化趋势与胞外ATP浓度的变化和溶酶体胞吐之间的关系。方法:采用新生24小时Sprague–Dawley大鼠建立原代耳蜗血管纹缘细胞体系。利用耳蜗冰冻切片和细胞爬片免疫荧光染色观察P2Y₂受体、P2Y₄受体和IP3受体在缘细胞的表达。利用激光共聚焦显微镜实时观察缘细胞在单独加入外源性ATP和预先孵育P2YR-PLC-IP3嘌呤信号系统抑制剂后Ca²⁺浓度变化趋势;观察单独加入溶酶体膜裂解剂GPN后和预先孵育P2YR-PLC-IP3嘌呤信号系统抑制剂后Ca²⁺浓度变化趋势。然后利用化学生物发光法检测加入尿苷三磷酸（UTP）、溶酶体膜裂解剂GPN、内质网衰竭剂TG和溶酶体胞吐抑制剂Vacuolin-1后缘细胞外ATP浓度,以了解Ca²⁺浓度变化与胞外ATP浓度之间的关系。测定缘细胞中溶酶体胞吐特异性酶β-氨基己糖苷酶在加入UTP、GPN、TG和Vacuolin-1的释放率,以了解Ca²⁺浓度变化与溶酶体胞吐作用之间的关系。结果:P2Y₂受体和IP3受体均表达于新生大鼠耳蜗血管纹缘细胞,其中P2Y₂受体表达于细胞膜上,而IP3受体表达于细胞质中。ATP和GPN可通过P2YR-PLC-IP3信号通路诱发内质网钙库释放,可被P2YR-PLC-IP3信号通路拮抗剂抑制。缘细胞外ATP浓度和β-氨基己糖苷酶释放率与细胞内Ca²⁺浓度变化呈正相关。结论:缘细胞外ATP作用于P2Y嘌呤能信号系统触发内质网钙库释放,胞内钙离子诱导溶酶体胞吐作用释放ATP至胞外,从而发挥其生物学作用。