双水相萃取是一种常用的分离富集技术,具有萃取效率高、选择性好、操作条件温和以及设备简单等特点,因此应用十分广泛。本文采用双水相萃取体系用于痕量维生素B12的分离,结合电热原子吸收光谱方法通过定量钴实现对维生素B12的测定,为复杂基体中痕量维生素B12的分离富集及准确定量分析提供了新方法。实验选择异丙醇-硫酸铵双水相体系,利用双水相有机上相对疏水性螯合物的选择性萃取和维生素B12结构中卟啉环具有较强的疏水性,在高浓度无机Co2+共存的情况下(500倍)有效地实现了维生素B12的选择性分离,消除了电热原子吸收光谱法定量分析维生素B12时无机钴的干扰,并取得了一定的富集效果。对双水相体系萃取剂和盐析试剂种类、成相组分的用量、萃取时间和样品pH等实验参数进行了优化,并对萃取机理进行了探讨。在样品用量为2.0mL时,采用1.1g硫酸铵固体和200μ.L异丙醇组成的双水相体系对50μg L-1的维生素B12溶液进行萃取分离,富集倍数为11.8。取20μL双水相体系上相进行电热原子吸收检测,线性范围为2～100μg L-1,检出限为0.6pg L-1(36,n=11),相对标准偏差为2.8%(50μg L-1,n=9)。将所建立的方法应用于功能饮料、保健药片、牛肝等实际样品中维生素B12的含量测定,测得结果与标示值相符,加标回收率在97%-104%之间。