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背景和目的:牙本质敏感症是一种临床上的常见病、多发病,其发病机制还不完全清楚,普遍被人们所接受的是流体动力学说。根据流体动力学说,通过物理或化学手段封闭牙本质小管,减少或避免外界刺激引起牙本质内的液体流动是治疗牙本质敏感症的重要途径。目前药物治疗仍然是治疗牙本质过敏的常用方法,如含氟涂膜,虽然其已被证实抗牙本质敏感效果,但在口腔中保存时间短,发挥抗牙本质敏感的作用短。故目前关于治疗牙本质敏感的药物研究重点在对疗效持久性的要求上。葡萄籽提取物原花青素作为一种天然的植物多酚,已被证实具有抑菌,抑制矿化或促进根面龋再矿化以及其与胶原发生交联并保护胶原的作用;羟基磷灰石是人体骨和牙齿的重要组成成分,纳米羟基磷灰石被证实能有效的封闭牙本质小管来缓解牙本质敏感。锶被认为能抑制牙本质敏感,而研究证实掺锶纳米羟基磷灰石也具有强大的吸附作用和抑菌防龋作用。原花青素在口腔抗牙本质敏感方面的应用研究目前少有报道,将其与锶纳米羟基磷灰石结合发挥作用的报道尚未发现。本研究尝试人工合成锶纳米羟基磷灰石原花青素复合物并通过试验探讨其对牙本质小管的封闭作用。 材料和方法: 1.原花青素封闭牙本质小管作用研究:在体外环境,以新鲜拔除的牛下颌切牙制备1cm直径*1mm厚度牙本质标本,EDTA溶液+超声荡洗部分脱矿,开放牙本质小管口,随机选取其中10块分为(4mg/ml)原花青素组和空白组,每组5个标本,试验组原花青素处理5分钟,每天两次,放入2%牛血清蛋白的SBF溶液中进行体外循环;空白组不处理,仅每天两次换新鲜配置的2%牛血清蛋白的 SBF溶液。循环7天后的牙本质样本送检SEM检测并进行表面形貌分析,EDX及FTIR检测其牙本质小管内生成物成分,了解原花青素对牙本质的作用。 2.锶纳米羟基磷灰石的制备:采用溶胶-凝胶法制备锶纳米羟基磷灰石,通过Ca、P测试其Ca/P比及Sr含量,进行TEM、XRD、FTIR检测。 3.锶纳米羟基磷灰石原花青素复合体的制备:在体外化学条件下探讨前述制备的锶纳米羟基磷灰石(α=0,α=0.5)吸附原花青素(浓度为4mg/ml)的条件(温度、PH、时间),并选择最佳条件下完成锶纳米羟基磷灰石对原花青素的吸附,制备复合体,通过TEM、SEM观察表面形貌。 4.锶纳米羟基磷灰石原花青素复合体涂膜的制备及其对牙本质小管封闭作用研究:以渗透型丙烯酸树脂(Eudragit RL100)为成膜基质,锶纳米羟基磷灰石原花青素复合体、纳米羟基磷灰石原花青素复合体、锶纳米羟基磷灰石、纳米羟基磷灰石及单纯的4mg/ml原花青素作为材料制备涂膜,选用实验一制备的牙本质标本,编号后随机分组:A、锶纳米羟基磷灰石原花青素复合体涂膜组;B、纳米羟基磷灰石原花青素复合体涂膜组;C、锶纳米羟基磷灰石涂膜组;D、纳米羟基磷灰石涂膜组;E、含氟涂膜组(阳性对照);F、原花青素涂膜组;G、空白组,每组5个,涂膜均匀涂布在牙本质块表面并进行体外循环,模拟口腔环境的条件下每天刷牙两次,每次3分钟和换液两次,循环7天后用丙酮去尽涂膜,通过体式显微镜观察涂膜保存情况及丙酮去尽涂膜情况,SEM观察牙本质小管封闭情况,EDX、FTIR分析牙本质小管内封闭物成分;重新制备4*4*4mm牙本质块,EDTA溶液+超声开放牙本质小管,除颊侧牙本质面其余使用指甲油封闭,随机选择10块涂布含有罗丹明B的涂膜切片送检CLSM,观察涂膜进入牙本质小管的深度,再随机选择6块分别分为锶纳米羟基磷灰石原花青素复合体涂膜组、含氟涂膜组及空白组投入罗丹明B溶液中,切片送检CLSM对比观察涂膜封闭性能。 5.细胞毒性检测:分别制备SrHAP-PA,HAP-PA,SrHAP和HAP复合体粉末及相应涂膜不同浓度浸提液,其中复合体粉末浓度分别为100%,50%,10%,涂膜浓度分别为2倍、4倍及8倍,通过牙龈成纤维细胞和牙髓细胞应用CCK-8法检测前述浸提液的细胞毒性,以验证其生物安全性。 结果:1.原花青素(浓度为4mg/ml)作用在开放牙本质小管上浸泡在SBF溶液中可形成矿化物并封闭开放的牙本质小管,该矿化物经EDX及FTIR分析提示为HAP。 2.采用溶胶-凝胶法可以制备出晶型好,直径100nm左右,(Ca+Sr)/P比约为1.67锶纳米羟基磷灰石。 3.在温度为37℃、PH偏酸性(PH=6.4)及时间为1h时,锶纳米羟基磷灰石对原花青素有最大吸附作用,可形成锶纳米羟基磷灰石原花青素复合体。 4.以渗透型丙烯酸树脂为成膜基质,锶纳米羟基磷灰石原花青素复合体为材料可制备出一种保存时间长,封闭牙本质小管效果佳的抗牙本质敏感的涂膜,该涂膜在模拟的口腔环境下,通过 SEM、CLSM、EDX、FTIR检测证实该涂膜可快速形成矿化物,封闭牙本质小管。 5.CCK-8检测前述复合体及涂膜不同浓度浸提液对人牙周膜成纤维样细胞及牙髓细胞细胞毒性结果显示均无细胞毒性。 结论:本研究证实原花青素可封闭开放的牙本质小管,通过溶胶-凝胶法制备获得锶纳米羟基磷灰石并制备获得锶纳米羟基磷灰石-原花青素复合物;以渗透型丙烯酸树脂作为成膜基质,以锶纳米羟基磷灰石-原花青素复合物作为有效成分所制备的涂膜材料可有效封闭牙本质小管且细胞毒性低。