杧果细菌性角斑病是杧果生产上的重要病害,果实一旦染病便会失去商品价值,严重时甚至失收。目前主要通过日常栽培管理和喷洒化学药剂等方法防治该病害。防控效率较低且容易造成环境污染。研究表明培养抗病品种是预防该病发生的有效方法,解析杧果的抗病遗传机制,可为优质抗病新品种的创制提供理论依据。为了阐明杧果对细菌性角斑病的抗性遗传特性,本实验通过室内接种法对凯特、热农一号等33份杧果种质抗细菌性角斑病性状进行评价,同时利用SSR分子标记对33份杧果种质材料进行遗传多样性分析,获悉杧果种质材料间的遗传差异;在分析种质材料群体结构和品种抗性评价基础上,结合简化基因组测序结果进行抗病性关联分析,获得与抗细菌性角斑病显著关联的位点,为后续抗病育种研究提供参考和分子标记资源,加快了杧果抗病育种的进程。杧果对细菌性角斑病的抗病性鉴定:选取凯特、热农一号和金煌等33个生产上常见的杧果栽培品种,采用室内离体杧果果实刺伤接种的方法,根据不同杧果种质的感病情况,结合系统聚类分析法、病斑平均直径法、病情指数法等评价方法对其抗病性进行分级。结果表明:在33份杧果种质中,热农一号和KRS对细菌性角斑病表现为高抗,Zillate、鹰嘴等5个品种为中抗材料;中感材料有0902、0905、圣心、玉文等15个;感病材料有广西四号、东镇红杧、大头杧等7个;高感材料有凯特和红象牙等4个。通过DPS数据处理软件进行数据处理,聚类分析得到不同品种的抗病性系统发育树。2个高抗品种和4个高感品种可用于杧果抗病育种的进一步研究。基于SSR标记分析杧果遗传多样性:从109对SSR引物中筛选出30对条带清晰、多态性良好的SSR引物。30对引物共扩增出203条条带,其中159条带具有多态性,多态性比率为79.72%。每对引物均可扩增出3-9条多态性条带,平均5.3条多态性条带,条带分子量大小介于100 bp-400 bp之间。聚类结果显示,在遗传距离为0.63处33份杧果种质可被分为6个类群。通过对比高抗品种热农一号、KRS,中抗品种Zillate、澳杧等与全部感病品种的聚丙烯酰胺凝胶电泳图,发现对细菌性角斑病具有抗性的杧果品种都扩增出了6个不同类型大小的条带,且这6个类型条带在感病品种的电泳图中均未发现。因此,得到6个大小不同的可能和杧果细菌性角斑病抗性有关的条带。条带大小分别为100 kb、150kb、180 kb、200 kb、300 kb、400 kb。杧果种质的简化基因组测序:对33个杧果样本进行GBS测序,基于所得的SNP信息,计算品间距离,对样本进行聚类分析,得到样本的系统发育进化树。33个杧果品种,被分为了6个类群。使用软件MISA对所有序列进行搜索,寻找序列中的SSR片段。结合杧果种质基于SSR标记的遗传多样性分析结果和杧果对细菌性角斑病的抗病性评价结果,进行关联分析,发现所有SSR片段中共有三种类型,大小在100 kb、150 kb和200 kb左右的111个SSR片段可能和杧果对细菌性角斑病的抗病性有关。本研究利用简化基因组测序和SSR分子标记对杧果抗细菌性角斑病的抗性机制进行了研究,为后续杧果基因组学研究及杧果抗病育种奠定了基础。