【摘 要】
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高原鼠兔(Ochotona curzoniae)是青藏高原高海拔地区特有的物种,为了研究其对高原环境的适应机制,用聚丙烯酰胺凝胶电泳观察心、肝、肺、肾、脑、骨骼肌和睾丸组织乳酸脱氢酶
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高原鼠兔(Ochotona curzoniae)是青藏高原高海拔地区特有的物种,为了研究其对高原环境的适应机制,用聚丙烯酰胺凝胶电泳观察心、肝、肺、肾、脑、骨骼肌和睾丸组织乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)同工酶谱,我们发现,在繁殖季节,高原鼠兔LDH同工酶谱在各组织中都表现出六条带,与睾丸和精子中的同工酶谱完全一样。而平原SD大鼠的体细胞组织中只有五条带,睾丸中却有六条带,其中从点样孔往下第三条为LDH-C4。我们推测,Ldh-c基因不仅在高原鼠兔精子中表达,而且在体细胞同样表达。为证明这一假设的可靠性,我们克隆了Ldh-c全长序列,分析了Ldh-c在体细胞中是否表达,以及海拔变化对睾丸中Ldh-c基因表达的影响。用聚丙烯酰胺凝胶电泳观察心、肝、肺、肾、脑、骨骼肌和睾丸LDH同工酶谱;用分子及生物信息学方法测定并分析高原鼠兔Ldh-c的cDNA序列;用Real-time PCR比较高原鼠兔睾丸内Ldh-c在不同海拔mRNA水平的表达。结果:同工酶谱显示,高原鼠兔各组织中均表现出位置一致的6条带。高原鼠兔Ldh-c基因全长1 624bp,包括106bp的5′端非编码区,519bp的3′端非编码区和一个999bp的编码区。开放式阅读框架起始于107位核苷酸起始密码子ATG,终止于1 105位核苷酸TAA终止密码子。高原鼠兔Ldh-c基因的编码区序列与牛,人,大鼠,小鼠分别有84.98,86.09,76.38和76.88%的同源性。玉树鼠兔睾丸中的Ldh-c在mRNA水平上的表达显著低于海北鼠兔(P<0.05),同时在体细胞组织中并未发现Ldh-c基因表达。以上结果表明,高原鼠兔Ldh-c基因并不在体细胞组织中表达。体细胞组织和睾丸中表达一致的六条带仍有待进一步研究。尽管高原鼠兔是一种对高原环境高耐受性的动物,低氧对其生理仍有一定的影响。我们推测,随着海拔的升高,高原鼠兔Ldh-c基因的表达受抑制,抑制精子获能,从而对其生殖造成影响。
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