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目的:本研究主要探讨人脂联素重组体通过mTOR信号通路在骨肉瘤发生、发展中的抑制作用机制以及对骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭的影响,为骨肉瘤的发生、发展机制研究提供新的实验证据。方法:1、收集10例临床确诊骨肉瘤且未经化疗的患者为实验组,10例年龄、性别、体重指数相匹配的正常人为对照组,分别抽取血液标本,离心后取上清,用Western Blot法检测其血清中脂联素(Adiponectin)的表达水平。2、对处于对数生长期的正常成骨细胞hFOB1.19及三种人骨肉瘤细胞株MG-63、SaOS-2、U2OS分别提取蛋白后,Western Blot法检测以上四种细胞的脂联素受体1(Adiponectin receptor1, AdipoRl)及脂联素受体2(Adiponectin receptor2, AdipoR2)的表达水平。3、对处于对数生长期的MG-63细胞分别以1μg/ml的人脂联素重组体处理不同时间,Western Blot法检测/AMPK、ACC蛋白磷酸化水平,确定最佳的脂联素作用时间;然后根据脂联素最佳作用时间,选择不同浓度的脂联素作用于对数生长期的MG-63细胞后,Western Blot法检测AMPK、ACC、Akt、ERK、S6K、4EBP1蛋白磷酸化水平并确定最佳的脂联素作用时间。4、CCK-8法检测不同浓度的人脂联素重组体对MG-63细胞增殖的影响。5、划痕法检测不同浓度的人脂联素重组体对MG-63细胞迁移能力的影响。6、对MG-63细胞予以LY294002(50μmol/l)预刺激1小时后,用人脂联素重组体以最佳作用浓度刺激该细胞24h后,对其行侵袭能力检测;同时对该细胞内Akt、S6K1、4EBP1蛋白水平及磷酸化水平的表达进行检测。结果:脂联素(Adiponectin)在骨肉瘤患者血清中的表达水平低于正常人(P<0.01),差异有统计学意义。与正常成骨细胞hFOB1.19相比,人骨肉瘤细胞株MG-63细胞、SaOS-2细胞、U20S细胞的AdipoRl表达水平显著增高AdipoR2的表达水平无显著性差异。脂联素对MG-63细胞最佳作用时间为30min,最佳作用浓度1μg/ml。与对照组相比,经脂联素处理的MG-63细胞AMPK、ACC磷酸化水平显著增高(P<0.01), Akt、ERK、S6K、4EBP1的磷酸化水平显著下降(P<0.01)。通过CCK-8检测,发现人脂联素重组体能显著降低MG-63细胞体外增殖(P<0.01),并且在一定浓度范围内与浓度大小成正相关关系。划痕试验证实,脂联素抑制MG-63细胞的迁移能力,并且在一定浓度范围内与浓度大小成正相关关系。侵袭实验证实,脂联素、PI3K抑制剂LY294002及两者联合应用均抑制骨肉瘤MG-63的侵袭能力。经PI3K抑制剂LY294002及其联合脂联素处理后,MG-63细胞中Akt、ERK、S6K、4EBP1的磷酸化水平显著下降(P<0.01)。结论:脂联素具有抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭的作用,可能通过AMPK/mTOR、PI3K/Akt/mTOR、ERK/mTOR信号通路的交互作用来实现。