论文部分内容阅读
第一部分:人参皂甙Rg1对嗅鞘细胞迁移能力的影响目的:探讨人参皂甙Rg1对嗅鞘细胞(OECs)迁移能力及迁移相关因子基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及神经细胞黏附分子1(NCAM1)表达的影响。方法:从新生3~5d的SD大鼠嗅球取材获得嗅鞘细胞体外培养、纯化后,进行人参皂甙Rg1干预(40μg/ml浓度下干预72 h)并设置对照(加等量DMEM/F12培养基),通过划痕实验和Transwell小室实验检测人参皂甙Rg1对嗅鞘细胞迁移能力的影响。反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分别测定两组细胞迁移相关因子MMP-2、MMP-9和NCAM1的m RNA表达。通过Western-blot研究Rg1对嗅鞘细胞PI3K/Akt通路的影响。结果:Rg1组划痕愈合面积明显高于对照组(P<0.05);Rg1组嗅鞘细胞穿过隔离膜的细胞数量较对照组明显增多(P<0.05);RT-PCR结果表明:人参皂甙Rg1显著上调嗅鞘细胞MMP-2、MMP-9和NCAM1的m RNA表达(P<0.05)。Rg1能够促进嗅鞘细胞PI3K/Akt通路的活化。结论:人参皂甙Rg1通过上调嗅鞘细胞迁移相关因子MMP-2、MMP-9和NCAM1的表达,提高细胞的迁移能力,这一作用可能通过PI3K/Akt通路完成。第二部分:人参皂甙Rg1促进嗅鞘细胞修复脊髓损伤的实验研究目的:研究人参皂甙Rg1对嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)移植修复脊髓损伤能力的影响。方法:新生SD大鼠嗅球组织体外培养、纯化嗅鞘细胞,人参皂甙Rg1干预并设置对照,Allen打击建立大鼠脊髓损伤模型,随机分成三组,对照组(control)、嗅鞘细胞移植组(OECs组)和Rg1干预嗅鞘细胞移植组(Rg1+OECs组),于移植后第1、3、7、14、28天分别进行肢体活动BBB评分,并于第28d取损伤部位脊髓组织制作石蜡切片进行免疫组化检测;RT-PCR分别测定OECs组和Rg1+OECs组脊髓组织中CNTF和VEGF的m RNA表达。结果:Rg1+OECs组后肢运动恢复情况优于OECs组和对照组,组织切片示Rg1+OECs组神经元数量明显高于OECs组和对照组(P<0.01),GFAP表达量显著低于OECs组和对照组(P<0.01),HE染色示Rg1+OECs组脊髓组织结构清晰,囊性病变及细胞水肿坏死数量明显少于其它各组;RT-PCR结果显示人参皂甙Rg1显著上调嗅鞘细胞在移植宿主体内CNTF、VEGF的m RNA表达(P<0.05)。结论:人参皂甙Rg1能够通过上调嗅鞘细胞在宿主体内CNTF、VEGF的表达,提高嗅鞘细胞移植修复脊髓损伤的能力。