【摘 要】
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以Genebank中收录的来自Bacillus thuringensis israelensis的cytA基因序列为依据,设计了特异性的引物:cytAl和cytA2,用PCR的方法从一株韭蛆病原菌B.tTN-189中扩增到982bp的c
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以Genebank中收录的来自Bacillus thuringensis israelensis的cytA基因序列为依据,设计了特异性的引物:cytAl和cytA2,用PCR的方法从一株韭蛆病原菌B.tTN-189中扩增到982bp的cyt基因片段.利用设计的酶切位点此片段用HindⅢ/Xbal进行双酶切后,与克隆载pbluescriptⅡSK(+/-)连接,转化E.coliJM109,通过蓝白菌落的筛选,挑出转化子,并通过PCR和酶切验证了转化子的正确性,将重组子命名为pBl-cytT1.对质粒pBl-cytT1进行双酶切,回收cyt基因片段,将其亚克隆入穿梭质料(E.coli/B.t)pHT315中,转化E.coliJM109.得到了重组质粒pHT-cytT7.用IPTG诱导,使cyt基因在E.coliJM109中表达.通过对菌液O.D值的测定表明,诱导后的O.D值比未诱导的0.2-0.4,证实了cyt基因表达产物对大肠杆菌的毒害作用.菌液O.D值的下降是由于大肠杆菌细胞被溶解而造成的.利用羊血琼脂平板对经IPTG诱导,超声波破碎浓缩后的大肠杆菌裂解液进行的溶血反应表明,cyt基因的表达产物具有明显的溶血作用,但裂解液的溶血环要远远小于B.t.i和B.tTN-189.说明由大肠杆菌产生的Cyt蛋白仍然保持着其非特异性的溶细胞的天然特性,但cyt基因在大肠杆菌中的表在水平远低于其在B.t.中的表达水平.
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