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目的星形胶质细胞发挥着与神经元功能相关的重要生理作用。在中枢神经系统(CNS)损伤后,它们通过形态学和功能改变(例如反应性胶质增生)被激活以参与神经病理学过程。星形胶质细胞也可以作为免疫效应细胞,在损伤刺激后产生大量趋化因子和细胞因子,这可能加剧组织损伤的程度。巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)是一种促炎细胞因子,可促进受损脊髓星形胶质细胞中炎性细胞因子的产生。它是否能够促进星形胶质细胞释放趋化因子仍然未阐述清楚。本文拟研究脊髓损伤后促炎因子MIF和星形胶质细胞释放趋化因子之间的关系及其分子调控机制。方法成年雄性SD大鼠进行脊髓(T8-T10)砸伤,构建脊髓损伤模型;脊髓损伤后0d、1d、4d、7d四个时间点分别取材或灌注后再取材;Western blot检测脊髓损伤后的MIF蛋白表达情况,ELISA、免疫荧光等检测损伤后CCL5的表达情况;采用siRNA干扰CD74受体后,进行转录组测序和生物信息学分析;取新生1-3天的SD大鼠的脊髓进行星形胶质细胞的体外原代培养,用MIF重组蛋白,联合或不联合MIF特异性抑制剂4-IPP处理星形胶质细胞,ELISA检测CCL5的表达,验证转录组测序结果;采用siRNA干扰CD74受体后,加入MIF重组蛋白,通过Western blot检测磷酸化MAPKs及NFκB的表达;加入MAPKs的抑制剂,联合MIF重组蛋白,ELISA检测CCL5的表达;利用Transwell检测星形胶质细胞释放的CCL5对巨噬细胞迁移的影响;脊髓损伤模型构建完成后,在损伤位点注射4-IPP及CCL5重组蛋白,不同时间点灌注取材后,利用免疫荧光标记IBA-1观察体内巨噬细胞迁移的影响。结果1.CCL5/RANTES在脊髓损伤后的星形胶质细胞中显著增加,与MIF同步化表达。在损伤部位注射MIF抑制剂4-IPP导致CCL5蛋白水平显著降低。2.体外研究显示MIF通过与CD74膜受体相互作用能够促进星形胶质细胞产生CCL5,并且将该受体敲降时此效应被减弱。3.在星形胶质细胞中CCL5的产生被JNK抑制剂显著阻断,而不是由ERK和P38抑制剂阻断,表明JNK信号传导在调节CCL5表达中起重要作用。4.与M1型巨噬细胞相比,我们发现CCL5重组蛋白更有效地促进M2型巨噬细胞的迁移。结论1.MIF/CD74轴调控大鼠脊髓损伤后星形胶质细胞中CCL5的表达;2.MIF/CD74轴通过JNK通路调节CCL5的产生;3.CCL5促进M2型巨噬细胞的迁移。