胸膜肺炎放线杆菌溶血毒素特性鉴定及免疫原性研究

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我国流行的猪的传染性胸膜肺炎主要是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)血清型7型引起的。我们对该型菌株深8株分泌的溶血素进行了分析和研究。通过温度敏感试验,我们发现存在着两种溶血素,一种为热稳定的溶血素,经过60℃ 30分钟及121℃ 1小时的加热处理后仍有溶血活性,并且能够耐受甲醛和蛋白酶的处理,估计其性质可能是一种碳水化合物;另一种为热不稳定的溶血素,60℃ 30分钟或100℃ 3分钟就可以使其溶血活性彻底丧失,经过硫酸铵沉淀盐析及凝胶过滤层析提纯后,进行SDS-PAGE电泳,表明该溶血素为分子量65KDa的蛋白,对蛋白酶K敏感,其活性可被蛋白酶K所抑制,但却对甲醛不敏感。 我们用纯化的65KDa的溶血素蛋白与APP所有血清型的阳性血清做交叉中和实验和琼脂扩散实验。交叉中和实验中血清型1和4表现出很高滴度的中和抗体,表明与血清型7关系较近,而在琼脂扩散实验中,除了同源血清型7外,其它血清型如1、4、5、9的样品孔与溶血素抗原孔之间也出现了沉淀带。以上结果表明溶血素抗体的抗原结合位点可能有很多,但起中和作用的位点可能很少,只存在于几个血清型之间。由于自然感染APP某个血清型的猪的血清中存在着抗溶血素的中和抗体,故推测溶血素可能具有一定的免疫原性并参与免疫保护,于是我们把65KDa的溶血素蛋白用做抗原免疫兔子,然后进行攻毒,实验表明溶血素对同源菌株的攻击能够提供一定的免疫保护。
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