γ-氨基丁酸受体与小鼠卵母细胞成熟度的相关性研究

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目的以性成熟前雌性小鼠卵巢上不同成熟度的颗粒细胞为研究对象,测定γ-氨基丁酸(GABA)及其A型受体在小鼠颗粒细胞上的表达水平,探讨γ-氨基丁酸A型受体与小鼠卵母细胞成熟度的相关性。方法为刺激性成熟前雌性小鼠卵泡的生长,给予其腹腔内注射孕马血清促性腺激素(PMSG),并给予人绒毛膜促性腺激素(HCG)以诱发排卵,收集生发泡期(GV)和减数第2次分裂中期(MⅡ)卵母细胞周围的颗粒细胞。采用q RT-PCR技术,检测γ-氨基丁酸A型受体各个亚单位在GV期和MⅡ期颗粒细胞上的基因表达;采用Western blotting和组织免疫荧光技术,检测在GV期和MⅡ期颗粒细胞中A型受体α5亚基蛋白的表达;采用免疫组织化学技术,检测GABA在GV期和MⅡ期颗粒细胞上的表达及分布。结果(1)γ-氨基丁酸A型受体中α3、α5、β3、π、θ、δ亚基m RNA,均在小鼠GV期和MⅡ期颗粒细胞中均有所表达,其中α3、π、δ亚基m RNA在GV期颗粒细胞中的表达水平高于其MⅡ期,而β3、α5亚基在GV期的颗粒细胞中表达水平低于其MⅡ期,θ亚基在GV期和MⅡ期颗粒细胞上的表达几乎没有差异(P<0.05)(2)A型受体α4亚基仅在小鼠GV期的颗粒细胞上有少量表达,而在MⅡ期不表达,其余的A型受体α1、α2、α6、β1、β2、γ1、γ2、γ3、ε亚单位在GV期和MⅡ期颗粒细胞中均不表达(3)A型受体α5亚基蛋白在小鼠GV期和MⅡ期颗粒细胞的细胞膜和细胞质中均有表达,且其表达量随卵泡发育呈上调趋势(P<0.05)(4)根据免疫组化分析,在小鼠GV期和MⅡ期颗粒细胞胞质中均可见GABA的分布。结论GABA及其A型受体亚单位表达于小鼠不同成熟度的颗粒细胞中,其中部分A型受体α3、α5、β3、π、δ亚单位的表达变化与卵母细胞的成熟度有相关性,提示其可能参与小鼠卵泡发育和成熟的过程。
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