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硫柳汞(Thimerosal)是一种含汞有机化合物,可有效抑制微生物生长繁殖,从20世纪30年代开始,硫柳汞就作为防腐剂被添加至疫苗等生物制品当中,是一种应用广泛的疫苗防腐剂。目前,多剂量疫苗、灭活疫苗及类毒素等生物制品当中仍会添加硫柳汞等防腐剂以确保不被污染。硫柳汞在水溶液中会分解为硫代水杨酸和乙基汞,乙基汞可与游离半胱氨酸上的巯基发生共价修饰,因此硫柳汞的添加会对部分含半胱氨酸的疫苗效力产生影响。因此,硫柳汞和其他候选疫苗防腐剂对抗原影响的研究对保证疫苗效力及制剂稳定性来说至关重要。在本研究中,我们以人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)重组病毒样颗粒(Virus-like particles,VLP)为抗原,研究硫柳汞等不同疫苗防腐剂处理HPV VLP后抗原结合活性及免疫原性受到的影响。首先,我们筛选出28株针对HPV18 VLP的单克隆抗体,在对这些单抗的性质进行全面鉴定之后,从中选取6株识别不同免疫优势表位的中和单抗建立了HPV18 VLP多表位免疫化学质量分析方法;其次,我们在体外检测了硫柳汞对HPV VLP结合活性的影响,在体内检测了硫柳汞对HPV VLP疫苗免疫原性的影响,并使用具有中和活性的单抗检测经硫柳汞处理后的HPV VLP表位的完整性,此外,通过低温冷冻电镜(Cryo-electron microscopy,cryo-EM)和3D重构(3-dimensional reconstruction)技术观察到HPV18 VLP在硫柳汞处理前后的结构变化;随后,利用建立的质量分析方法考察4种候选疫苗防腐剂对HPV18 VLP结合活性的影响,利用差示扫描量热法(Differential scanning calorimeter,DSC)考察不同防腐剂对抗原热稳定性的影响,并且利用假病毒中和实验检测这些防腐剂影响HPV18假病毒侵染细胞的情况。通过考察4种候选疫苗防腐剂对含有半胱氨酸抗原的热稳定性、结合活性及免疫原性等方面的影响,综合选出较优的疫苗候选防腐剂,为后续多剂量疫苗制剂的研发以及疫苗防腐剂的选择提供一定参考价值。