[背景]冠心病(coronary heart disease, CHD)引起心脏重构,尤其是心肌梗死区和非梗死区心肌纤维化,被认为是心梗后心功能衰竭发生的决定性因素。目前心肌纤维化尚缺乏确切有效的治疗方法。因此,阐明冠心病心肌纤维化的形成机制和寻找有效的治疗方法已成为当前医学领域研究的热点。纤维化的特征主要表现为成纤维细胞(fibroblasts)聚积和细胞外基质(extracellular matrix, ECM)过度沉积。成纤维细胞/肌成纤维细胞(fibroblasts/myofibroblasts)是ECM生成的主要细胞,已被证明在纤维化形成中起着重要作用。新近研究表明,骨髓源性的纤维细胞(fibrocytes)是成纤维胞的重要来源,在多种器官组织纤维化形成中发挥重要作用。然而,纤维细胞在冠心病患者心肌纤维化形成中的作用研究鲜见报导。心脏震波治疗(cardiac shock wave therapy, CSWT)使用低能量震波(相当于震波碎石治疗能量的1/10),是一种有效、安全和非侵入性的治疗心血管疾病的方法。新近研究发现,CSWT可以诱导心梗周边区血管生成,改善心肌缺血患者的症状及延缓心室重构。据此推测CSWT有可能是治疗急性心肌梗死(acute myocardial infarction, AMI)后心肌纤维化的一种有效方法。然而,目前CSWT用于治疗AMI后心肌纤维化的研究尚未见报道。[目的]我们假设纤维细胞可能参与冠心病心肌纤维化形成,CSWT能够减轻心肌纤维化,其作用可能与减少纤维细胞数量有关。为了证明这一假说,我们在冠心病患者和正常心脏组织上观测纤维细胞及其趋化因子SDF-1/CXCL12的表达与定位,评价纤维细胞在冠心病心肌纤维化形成中的作用；在滇南小型猪复制AMI的实验动物模型上,评价CSWT对猪AMI后梗死周边区心肌纤维化的治疗作用及其与纤维细胞的关系,旨在为防治AMI后心肌纤维化寻找新的治疗细胞靶点和新策略提供一定的实验和理论依据。[方法]1.纤维细胞检测方法研究：用双重免疫组化法、免疫组化与免疫荧光联合标记法和双重免疫荧光标记法等三种双重免疫染色法,染色5例石蜡包埋CHD患者心脏组织切片,光学显微镜、荧光显微镜和共聚集显微镜观测CD45+/aSMA+纤维细胞。比较评价三种双重免疫染色法对CD45+/aSMA+纤维细胞检测的敏感性。2.人心脏组织标本研究：选取法医解剖的27例CHD患者和11例正常人心脏标本作为研究对象。纳入本研究的CHD心脏标本具体确诊标准：冠状动脉粥样硬化,严重的心肌梗死和／或心肌疤痕,同时无冠心病外的其它心脏疾病。(1)常规固定、石蜡包埋,HE染色心脏组织标本。(2)用免疫荧光染色和共聚集显微镜观察心脏组织标本中五种双重免疫荧光标记的纤维细胞(CD34+/aSMA+、 CD34+/procollagen-Ⅰ+、CD45+/aSMA+、CXCR4+/procollagen-I+和CXCR4+/aSMA+)。(3)用Masson三色法检测胶原体积分数(collagen volume fraction),评价纤维细胞与心肌纤维化的相关性。(4)用免疫组化法检测心脏组织中纤维细胞趋化因子CXCL12的表达定位。3.动物实验研究：选用滇南小型猪25头为研究对象。实验随机分三组：AMI组(n=5); AMI+CSWT组(n=15); CSWT组(n=5)。CSWT:用低能量震波(每个缺血区分9点进行治疗,每点释放200次脉冲,每次脉冲能量为0.09m J/mm2,相当于震波碎石治疗能量的1/10)作用于梗死周围的心肌组织,疗程为心梗后第3、5、7天各一次,共三次。各实验组动物用戊巴比妥钠过量麻醉处死,取心脏多聚甲醛固定、石蜡包埋和常规HE染色。心脏组织标本中纤维细胞、胶原体积分数和CXCL12的表达定位检测方法同上。[结果]1.纤维细胞检测方法研究在检测CHD心脏组织内CD45+/αSN4A+纤维细胞的三种方法中：双重免疫荧光标记法能够较清楚地识别|CD45+/αSMA+纤维细胞；免疫组化与免疫荧光联合标记法可识别CD45+/αSMA+纤维细胞,但容易产生大量假阳性细胞；双重免疫组化法难以识别CD45+/αSMA+纤维细胞。2.人心脏组织标本研究(1)纤维细胞检测结果显示：在27例CHD患者中,26例心脏心肌梗死区被检测到有纤维细胞存在,11例正常人心脏中有10例存在纤维细胞；CHD患者心脏组织中纤维细胞数量均明显多于正常人心脏组织(CD34+/αSMA+:5.65±5.52vs.1.6±1.58；CD34+/procollagen-Ⅰ+:4.33±2.68vs.1.7±1.57；CD45+/αSMA+:4±3.43vs.1.5±1.20；CXCR4+/procollagen-Ⅰ+:4.59±3.84vs.0.67±1.00；CXCR4+/αSMA+:4.21±3.53vs.0.91±1.30,P<0.05)。(2)相关分析结果显示：CHD患者心脏组织的胶原体积分数与纤维细胞数呈正相关关系(r=0.558,P<0.05)；CHD患者心脏组织中CXCR4+纤维细胞数与CXCL12+细胞数呈正相关关系(r=0.741,P<0.05)。3.动物实验研究(1)胶原体积分数检测结果显示：AMI组猪心脏胶原体积分数明显高于CSWT组(27.21±8.13vs.1.78±0.57,P<0.05),而AMI+CSWT组猪心脏胶原体积分数明显低于AMI组(10.13±4.96vs.27.21±8.13,P<0.05)。(2)纤维细胞数量检测结果显示：AMI组纤维细胞数量明显多于CSWT组(CD34+/αSMA+:35.40±11.72vs.1.40±1.14；CXCR4+/SMA+:40.80±8.96vs.1.80±1.30,P<0.05),而AMI+CSWT组纤维细胞数量明显少于AMI组(CD34+/αSMA+:12.27±7.71vs.35.40±11.72；CXCR4+/αSMA+:16.54±6.38vs.40.80±8.96,P<0.05)。(3)相关分析结果显示：三个实验组中心脏组织胶原体积分数与纤维细胞数呈正相关关系(r=0.936,P<0.05):CXCR4+纤维细胞数与SDF-1/CXCL12+细胞数呈正相关关系(r=0.802,P<0.05)[结论]1.双重免疫荧光标记法是一种检测识别常规石蜡包埋心脏组织中纤维细胞存在的较好方法。2.纤维细胞可能是CHD患者心肌纤维化形成的一个重要参与者,迁移到CHD心脏组织的纤维细胞数量可能与趋化因子SDF-1/CXCL12的趋化作用有关。纤维细胞可能是心肌纤维化治疗的一个潜在细胞靶点。3.CSWT能够减轻猪AMI后心肌纤维化的程度,其作用可能与减少纤维细胞和SDF-1/CXCL12+的细胞数有关。CSWT有可能是防治CHD心肌纤维化的一个新策略。