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通过染色体加倍创造多倍体是开展倍性杂交获得柑橘无核新种质的一个重要途径,也是柑橘育种主要目标之一。本研究用colchicine(简写col)和oryzaline简写ory)处理柑橘原生质体和/或愈伤组织,主要结果如下: 1、用0.01%、0.05%、0.1%的colchicine和0.005%、0.01%、0.02%的oryzalin处理宁波金柑(Fortunella crassifolia cv. Meiwa)原生质体24h,结果表明:随着浓度的提高,原生质体活力降低,但oryzalin比colchicine的毒性低,前者处理的原生质体活性较高;原生质体处理后活性最高的处理是0.005%ory和0.01%col,分别达到90.51%和88.23%。用0.01%、0.05%、0.1%的col处理伏令夏橙(Citrus sinensis cv. Valencia)原生质体8h后,原生质体活性急剧下降;当处理时间为8h,浓度为0.05%时,活力达到最高85.85%。 2、用0.01%、0.05%、0.1%的colchicine处理佛罗斯特(C. sinensis cv. Frost)脐橙愈伤组织2d、4d、8d,结果表明:在0.1%col-4d和0.1%col-8d处理中分别检测到1个和5个四倍体胚状体,目前各获得1棵四倍体植株。此外,在0.1%col-8d处理中检测到1个嵌合体胚状体。 3、用0.01%、0.05%、0.1%的colchicine分别处理宁波金柑原生质体8h、16h、24h,其中0.05%col-24h处理的四倍体单细胞系诱导率最高(30.77%),其次是0.1%col-8h和0.01%col-24h,诱导率分别为19.23%和17.71%。其中处理0.05%col-24h再生愈伤组织,处理0.1%col-16h再生胚状体,而处理0.1%col-8h获得的愈伤组织成功再生出芽。用0.005%、0.01%、0.02%的oryzalin处理宁波金柑原生质体24h和48h,未检测到四倍体胚状体。0.01%、0.05%、0.1%的colchicine处理伏令夏橙原生质体2h和4h,结果只有处理0.01%col-4h得到四倍体单细胞系,诱导率为22.86%,四倍体愈伤组织再生胚状体,但未能再生成芽。 4、测定了宁波金柑、国庆1号(C. unshiu ’Guoqing No.1’)和伏令夏橙的二倍体和四倍体细胞直径。三个品种的二倍体细胞直径分别为20.40±2.47μm、21.53±2.87μm、21.50±3.27μm;四倍体细胞直径分别为29.50±2.62μm、33.00±3.15μm、29.75±2.88μm。 5、测定了宁波金柑、国庆1号和伏令夏橙二倍体和四倍体细胞周期。三个品种的二倍体细胞分裂高峰分别出现在继代培养后第4d、6d、4d,细胞分裂指数分别为25.5±1.5%、25.3±0.6%、31.8±1.0%;而四倍体细胞分裂高峰分别出现在继代培养后第6d、10d、4d细胞分裂指数分别为22.7±1.0%、21.2±1.2%、28.8±2.7%。 6、用24对AFLP引物对宁波金柑胚状体和国庆1号愈伤组织的二倍体和四倍