【摘 要】
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伪狂犬病病毒（Pseudorabies Virus,PRV）引发的伪狂犬病（Pseudorabies,PR）给我国养猪业造成巨大经济损失。肝X受体（Liver X Receptors,LXRs）是细胞调节胆固醇代谢的因子,它和PRV之间的关系尚未报道。本研究深入研究了PRV抑制LXR表达促进病毒复制的分子机制,为PRV的防控提供了新的策略。主要研究结果如下:1.PRV感染下调LXRs表达本研究首先
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伪狂犬病病毒（Pseudorabies Virus,PRV）引发的伪狂犬病（Pseudorabies,PR）给我国养猪业造成巨大经济损失。肝X受体（Liver X Receptors,LXRs）是细胞调节胆固醇代谢的因子,它和PRV之间的关系尚未报道。本研究深入研究了PRV抑制LXR表达促进病毒复制的分子机制,为PRV的防控提供了新的策略。主要研究结果如下:1.PRV感染下调LXRs表达本研究首先通过qRT-PCR和Western Blot检测PRV感染细胞后LXRs表达水平,结果显示PRV感染下调细胞内LXRs转录和翻译;进一步利用PRV滴鼻感染小鼠,三天后取小鼠肺组织进行q RT-PCR和Western Blot检测LXRs表达水平,结果证明PRV感染后下调肺组织中LXRs表达。2.LXRs负调控PRV复制本研究接下来鉴定了LXRs与PRV复制的关系。滴度及流式细胞术结果证明LXRs反向激动剂SR9243和敲减LXRs表达均促进PRV复制。进一步利用LXRs激动剂检测了其对PRV复制的影响。利用CCK-8法确定了四种LXRs激动剂（LXR-623,T0901317,22R-HC,GW3965）的无毒性和有效使用浓度。流式细胞法和滴度结果证明四种LXRs激动剂显著抑制PRV复制;Western Blot结果证明激活LXRs显著降低PRV蛋白表达水平。以上结果说明激活LXRs抑制PRV复制。3.激活LXRs降低细胞胆固醇水平,进而抑制PRV进入依赖的网格蛋白包被小泡动力学为了确定LXRs如何抑制PRV复制,检测了LXRs激动剂T0901317对PRV生活周期的影响,结果表明T0901317处理细胞后抑制PRV进入细胞。Filipin染色和生化测定结果表明T0901317抑制PRV感染引起的胆固醇增多,q RT-PCR和Western Blot结果显示外源补加胆固醇能够回复PRV进入细胞。进一步通过FRAP及细胞膜蛋白生物素化标记实验证实T0901317通过抑制网格小泡动力学抑制PRV进入细胞,外源补加胆固醇能够回复网格小泡动力学和PRV进入细胞。4.T0901317在小鼠体内预防PRV感染给小鼠先注射T0901317后再感染PRV,结果表明注射T0901317小鼠存活率显著高于对照小鼠;Western Blot和免疫组化结果显示注射T0901317小鼠肺组织中PRV g E表达低于对照小鼠肺组织;H＆E染色结果显示T0901317能够缓解PRV感染引起的肺部损伤。以上研究结果表明T0901317在小鼠体内预防PRV感染。
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猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）和猪δ冠状病毒（Porcine deltacoronavirus,PDCoV）是引起仔猪急性腹泻的主要猪肠道冠状病毒。PEDV与PDCoV共感染现象在猪群中很普遍,严重影响养猪业的健康发展,但PEDV与PDCoV协同感染的临床结果尚不清楚。在本研究中,我们将PEDV与PDCoV按不同的接种顺序感染4日龄健康
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