【摘 要】
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水飞蓟宾作为水飞蓟素的主要活性成分,因其对肝脏具有强保护作用,受到了膳食补充剂市场的广泛关注。然而,水飞蓟宾的生物利用度低,溶解度小等原因,严重阻碍它的应用和发展。为了提高水飞蓟宾的溶解性,本文利用重组日本囊对虾虾铁蛋白（rMjF）装载水飞蓟宾,主要研究成果如下:1、本实验将收集的重组大肠杆菌菌体进行超声破碎,先后采用加热处理（65℃,10min）和饱和硫酸铵复合处理（20%和40%饱和硫酸铵双重
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水飞蓟宾作为水飞蓟素的主要活性成分,因其对肝脏具有强保护作用,受到了膳食补充剂市场的广泛关注。然而,水飞蓟宾的生物利用度低,溶解度小等原因,严重阻碍它的应用和发展。为了提高水飞蓟宾的溶解性,本文利用重组日本囊对虾虾铁蛋白（rMjF）装载水飞蓟宾,主要研究成果如下:1、本实验将收集的重组大肠杆菌菌体进行超声破碎,先后采用加热处理（65℃,10min）和饱和硫酸铵复合处理（20%和40%饱和硫酸铵双重处理）去除大部分的杂蛋白,通过两次超滤（截留分子量分别为30 k Da和50 k Da）成功纯化了rMjF。透射电子显微镜（TEM）证明rMjF是脱铁铁蛋白;SDS-PAGE表明rMjF是由单亚基（分子量约20 k Da）组成;通过红外光谱分析发现,rMjF二级结构中α-螺旋的占比最高（57.91%）;37℃下进行贮藏实验的结果表明,rMjF在14天内无明显的降解。2、利用rMjF的自组装特性,制备了rMjF-水飞蓟宾复合物。通过对rMjF的解离p H、rMjF的浓度以及rMjF与水飞蓟宾的摩尔比进行单因素优化实验,得到最佳制备条件为:2.0μmol/L的rMjF在p H 2.0的条件下解离,添加400μmol/L的水飞蓟宾,rMjF-水飞蓟宾复合物中水飞蓟宾的装载率最高,约为30%。TEM证明水飞蓟宾已成功装载到rMjF中;红外光谱法对复合前后rMjF的二级结构进行分析,发现复合后rMjF的二级结构中α-螺旋降低16.91%,β-折叠增加22.98%。3、rMjF-水飞蓟宾复合物使水飞蓟宾的溶解度显著提高,增加了约22倍;对rMjF-水飞蓟宾复合物中水飞蓟宾的释放特性进行研究,4℃、25℃和37℃三种温度下均符合Ritger-Peppas释放模型,且在4℃条件下,水飞蓟宾的释放速率最低;对rMjF-水飞蓟宾复合物和游离水飞蓟宾分别进行体外模拟胃肠道释放特性分析,结果表明,胃液消化30min,前者比后者减少了12.64%水飞蓟宾的释放,之后进行肠液消化30 min,前者比后者减少了25.26%水飞蓟宾的释放。综上所述,该研究利用20%和40%饱和硫酸铵双重处理结合其他技术成功纯化了rMjF,制备的rMjF-活性成分复合物也为将来甲壳动物源铁蛋白生物制剂的研发提供一定的参考价值。
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