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利用含有质粒pKD46的大肠杆菌菌株BW25113,在阿拉伯糖诱导后,表达入噬菌体的3个重组蛋白Gam,Bet和Exo。Gam蛋白抑制了宿主的RecBCD核酸外切酶V活性,而Bet和Exo参与了基因重组过程,因此宿主菌就具有了同源重组的能力。设计的引物5’端有39bp的拟敲除基因的同源臂,3’端为扩增引物,以pKD3(或pKD4)为模板,扩增两侧含FRT位点的氯霉素(或卡那霉素抗性)基因,将此线性片段电转入具重组功能的感受态细胞,利用氯霉素(或卡那霉素抗性)平板就可以筛选到阳性转化体。再利用表达Fl